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同時鑒定和定量水果和蔬菜中300種農(nóng)藥及其代謝物
閱讀：700 發(fā)布時間：2020-6-15目前,，世界上使用的農(nóng)藥已超過800種,，其中很多化合物在飲用水和食品中法定允許量即大殘留 限要求得到控制。對于這種目標物分析,，迫切需要能夠進行同時多殘留組分的分析方法,，這樣可以大大 降低工作量。但是,，很多農(nóng)藥用GC-MS分析很困難或幾乎不能分析,，但是卻可以用LC-MS/MS多殘留組分 分析方法進行鑒定和定量。MRM（多反應(yīng)監(jiān)測）是優(yōu)先選擇的掃描模式,，然而,，對每個農(nóng)藥而言，單一 MRM離子對并不能夠確證該農(nóng)藥的存在,，需要采用第二個MRM離子對來驗證分析結(jié)果,。絕大多 數(shù)樣品，如水果,、蔬菜等,，含有需要監(jiān)測的農(nóng)藥種類不超過10%，因此,，一部分確證離子對并不需要,，因 為有部分農(nóng)藥并不存在，先前的采集時間浪費掉了,。所以,，我們研究了一種采用單一MRM離子對鑒定和 定量農(nóng)藥的方法。
本研究利用新型串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀- 四極桿 -線性離子阱融合質(zhì)譜儀3200 QTRAP®的MRM掃描觸 發(fā)“增強子離子掃描EPI”的“信息關(guān)聯(lián)掃描information-dependent acquisition (IDA)”技術(shù)確證所檢測的化 合物,。其結(jié)果是MS/MS系統(tǒng)的采集時間主要用于大多數(shù)目標化合物的快速篩選上,，只有當檢測到某個 農(nóng)藥存在時才自動進行確證測定。確證測定提供了碰撞碎片離子的全譜,，與農(nóng)藥譜庫中的圖譜進行檢
索,、比較。
樣品制備 樣品制備如圖1所示
色譜分離條件 Agilent 1100液相色譜系統(tǒng)：二元泵系統(tǒng),、自動進樣器,、柱溫箱。 色譜柱：Phenomenex Aqua,，5 µm,，18 Å，C18，50 mm×2 mm,。 流動相：A相—水 + 5 mmol/L甲酸銨,；B相—甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨。 步驟 時間 (min) 流速(µL/min) A (%) B (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃,；進樣體積：20 µL,。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：二元泵系統(tǒng)、自動進樣器,、柱溫箱,。 色譜柱：Phenomenex Aqua，5 µm,，18 Å,，C18，50 mm×2 mm,。 流動相：A相—水 + 5 mmol/L甲酸銨,；B相—甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨。 步驟 時間 (min) 流速(µL/min) A (%) B (%) 0 0.00 200 80 20 1 11.00 200 10 90 2 23.00 200 10 90 柱溫箱溫度：20 ℃,；進樣體積：20 µL,。
MS/MS檢測 3200 QTRAP® LC-MS/MS系統(tǒng)，TurboIonSpray®離子源（450 ℃）,，正離子方式模式,。采用IDA關(guān)聯(lián)掃 描包含297組MRM離子對（駐留時間為5 ms，停留時間為1 ms,，碰撞能量CE分別為+20,、+35、+50 eV） 的篩選檢測掃描和在20,、35,、50 eV碰撞能下3個EPI掃描，掃描速度4000 amu/s,，填充時間（fill time）為 100 ms,。采用動態(tài)背景減法（DynamicBackgroundSubtraction，SBS）對篩選檢測掃描中的峰進行鑒定,，然 后在包含有碰撞能量CE分別為+20,、+35、+50 eV獲得的質(zhì)譜圖庫中檢索,、鑒定,。
結(jié)果 作為特色，串聯(lián)四極桿的MRM掃描由于其具有高靈敏度和高選擇性是定量測定的shou選,。要成功地進 行多目標農(nóng)藥化合物的檢測,，必須要有一個快速碰撞室,。技術(shù)LINAC® 線性加速碰撞室用在AB公 司所有的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀和四極桿-線性離子阱融合質(zhì)譜儀上，它采用一個軸向電場加速碰撞后的碎片 離子,，大大縮短了離子的駐留時間，而信號強度基本不受影響,。以前的研究發(fā)現(xiàn),，用API 2000™ LC-MS/MS 檢測100種農(nóng)藥時25 ms的離子駐留時間綽綽有余，如今,，3200 QTRAP® LC-MS/MS的靈敏度大大提高,，因 此可以極大地縮短每個MRM離子對的離子駐留時間，從而增加檢測化合物的數(shù)量,。圖2顯示了用5 ms駐留 時間檢測300種農(nóng)藥(100 ng/mL)的MRM色譜圖,。圖3顯示了1 ng/mL 12種農(nóng)藥的MRM靈敏度數(shù)據(jù)，可用于水
加水至 5 g或10 g干燥或含水樣品中總體積至10 mL
加入20 mL甲醇均化,，如需要可過濾或離心
加入氯化鈉溶液浸泡,，Chem Elut
二氯甲烷提取，蒸發(fā)至干
甲醇/水溶劑再溶解 (樣品濃度約 1 g/mL)
0.45 µm膜過濾
50 mm x 2 mm RP18-柱,，水 / 甲醇 + 5 mmol/L甲酸銨
LC-MS/MS ESI+,，297 MRM +3 EPI 模式分析
同時鑒定和定量水果和蔬菜中300種農(nóng)藥及其代謝物
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果和蔬菜提取物中農(nóng)藥的定量分析。圖4顯示了不同水果和蔬菜提取物的例子,，在蘋果樣品中發(fā)現(xiàn)了蟲酰 肼（tebufenozide）并定量為11 µg/kg,。為了確證蟲酰肼的定量數(shù)據(jù)，其EPI譜被自動采集并與譜庫中的圖 譜比對,。純度符合度（Purity Fit）是確定譜庫中的圖譜與未知物的圖譜符合的程度,，如圖5所示。用動態(tài) 背景減法（SBS）在檢測MRM離子對后觸發(fā)EPI掃描,，這樣對于確證特別是對于共洗脫化合物能夠獲得高 質(zhì)量的MS/MS圖譜,。