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分析氨基甲酸酯農(nóng)藥的實(shí)驗(yàn)方法
閱讀：1122 發(fā)布時(shí)間：2020-4-13色譜流動(dòng)相的制備： 1 M甲酸銨溶液：溶解 63 g甲酸銨于1 L HPLC級(jí)的水中。 流動(dòng)相A：在1 L HPLC級(jí)的水中,，加入5 mL 1 M甲酸銨溶液,。 流動(dòng)相B：在1 L HPLC級(jí)的甲醇中，加入5 mL 1 M甲酸銨溶液,。
樣品制備(蔬菜與水果基質(zhì)) 基于Anastassiadies等人提出的方法[1]： 1. 稱(chēng)量10 g 混合樣品,； 2. 加入100 µL 內(nèi)標(biāo)溶液 (D5-Atrazine，1 µg/mL),； 3. 加入10 mL乙腈,，劇烈振搖； 4. 加入4 g無(wú)水MgSO4和1 g NaCl,； 5. 馬上渦旋混合,，以防止MgSO4共聚物的生成； 6. 振搖30 s后,，4300 r/min離心5 min,； 7. 轉(zhuǎn)移初提液1 mL至含有150 mg無(wú)水MgSO4的離心管中； 8. 混合,，5200 r/min 離心1 min,； 9. 轉(zhuǎn)移上清液500 µL，用水稀釋到1 mL,，得到提取液濃度為0.5 g/mL
基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]： 1. 在5 g或10 g樣品中,，加入水到10 mL； 2. 加20 mL甲醇,，使用UltraTurrax 組織勻漿機(jī)勻漿2 min,； 3. 有時(shí)需要過(guò)濾，或離心,； 4. 加入NaCl 溶液 (100 mL水中含20 g NaCl),，每6 mL加入NaCl溶液2 mL； 5. 用5 mL樣品溶液浸泡 ChemElut 柱,； 6. 5 min后,，用16 mL二氯甲烷洗脫； 7. 40 ℃揮發(fā)至干； 8. 用甲醇與水的混合溶液1.25 mL（甲醇0.25 mL,，水1 mL）重新溶解,； 9. 用0.45 µm濾膜過(guò)濾。
基于Lehotay et al.[4]提出的方法： 1. 使用Molinex 混合器或類(lèi)似設(shè)備勻質(zhì)水果或蔬菜樣品,； 2. 加入乙腈,，( 15.0 ± 0.05 ) g勻質(zhì)的樣品加乙腈15 mL，超聲提取2 min后,，混旋5 min,；分析氨基甲酸酯農(nóng)藥的實(shí)驗(yàn)方法• 60 • 3. 加入6 g無(wú)水MgSO4和1.5 g NaCl的混合物，劇烈振搖1 min,； 4. 3000 r/min 離心5 min,； 5. 取5 mL上層溶液，加入1.8 g無(wú)水MgSO4和0.3 g Bondesil C8 吸附劑,； 6. 振搖20 s； 7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀,，或類(lèi)似設(shè)備揮發(fā)至干,； 8. 用乙腈 / 水＝1 / 9的溶液1 mL重新溶解樣品； 9. 12000 r/min 高速離心 2 min,； 10. 上清液轉(zhuǎn)入自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣瓶中備用,。
樣品制備(動(dòng)物組織)[5] 1．稱(chēng)取10 g試樣（豬肉、牛肉,、羊肉,、兔肉、雞肉）(精確至0.01 g),，放入盛有20 g無(wú)水硫酸鈉的50 mL 離心管中,，加入35 mL環(huán)己烷 + 乙酸乙醋混合溶劑，用均質(zhì)器在15000 r/min均質(zhì)提取1.5 min,，把離心管放 在離心機(jī)中,，在3000 r/min離心3 min。上清液通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的筒形漏斗,，收集于100 mL雞心瓶中,， 離心管中的動(dòng)物組織殘?jiān)儆?5 mL環(huán)己烷 + 乙酸乙醋混合溶劑提取一次，離心后上清液轉(zhuǎn)移到筒形漏斗 中,，合并提取液,，將提取液于40 ℃水浴用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約5 mL，待凈化,。若以脂肪計(jì),，將提取 液收集于已稱(chēng)量的雞心瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在40 ℃水浴蒸發(fā)至5 mL，然后再用氮?dú)獯蹈蓛x吹干殘存的溶 劑,，雞心瓶稱(chēng)量后,，待凈化。 2．將濃縮的提取液或脂肪用乙酸乙醋 + 環(huán)己烷混合溶劑 (1+1) 溶解轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中,，用5 mL 環(huán)己烷 + 乙酸乙酷混合溶劑分兩次洗滌雞心瓶,，并轉(zhuǎn)移至上述10 mL容量瓶中，再用環(huán)己烷 + 乙酸乙酷混 合溶劑定容至刻度,，搖勻?qū)右哼^(guò)濾入10 mL試管中,，供凝膠滲透色譜儀凈化，收集22～40 min的餾分于 100 mL雞心瓶中,，并在40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL,。用氮?dú)獯蹈桑儆?.0 mL乙睛 + 水 (60+40) 溶解殘?jiān)?供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè),。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng),、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱,。 色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱,，50 mm×2 mm，4 µm,，80 Å,。 流動(dòng)相：A相—水 + 5 mM 甲酸銨；B相—甲醇 + 5mM 甲酸銨,。
MS/MS 檢測(cè) API 3200™,、3200 QTRAP® LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。TurboIonSpray® 離子源,，正離子模式,，MRM掃描方式。
