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使用安捷倫凈化產(chǎn)品對(duì)毛發(fā)中的羧基-THC進(jìn)行 LC/MS/MS測(cè)定
閱讀：1409 發(fā)布時(shí)間：2020-3-27本應(yīng)用簡報(bào)比較了兩種 LC/MS/MS 型號(hào)，即 Agilent 6470A三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)和 Agilent 6495C 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng),。本研究總結(jié)了可用于復(fù)雜毛發(fā)基質(zhì)的 樣品前處理技術(shù),。同時(shí)還介紹了使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 執(zhí)行凈化步驟時(shí)選擇 用于驗(yàn)證的終方法，以達(dá)到毛發(fā)中羧基-THC 0.2 ng/g 的臨界濃度,。
通過毛發(fā)測(cè)試濫用藥物已有 50 多年的歷 史,。與生物體液相比，毛發(fā)測(cè)試的一個(gè)優(yōu) 勢(shì)在于它可提供更大的藥物檢測(cè)窗口期,。 許多藥物在毛發(fā)中保存完好,。一個(gè)示例是 在一具距今 900 年的木乃伊的毛發(fā)中檢 出了可ka因。毛發(fā)測(cè)試的應(yīng)用包括刑事調(diào) 查,，核實(shí)吸毒史,，鑒定藥物輔助性侵犯， 在兒童監(jiān)護(hù)權(quán)案件中證明DU品的使用,，假 釋犯、藥物治療參與者或員工的戒斷監(jiān) 測(cè),，記錄宮內(nèi)暴露情況,，以及確定某人是 否經(jīng)常吸食大麻從而確定能否重新申領(lǐng)駕 照。圖 1 顯示了大麻素進(jìn)入人體毛發(fā)的 可能途徑,。
由于毛發(fā)易于收集,、很難摻假且具有較長 的檢測(cè)期限，因此工作場(chǎng)所檢測(cè)計(jì)劃包 括毛發(fā)檢測(cè),。許多國家/地區(qū)均發(fā)布了工 作場(chǎng)所毛發(fā)檢測(cè)指南,。指南確定大麻代謝 物/mg 毛發(fā)的初始測(cè)試臨界濃度為 1 pg。 在巴西,，該限值由毛發(fā)分析協(xié)會(huì) (SoHT) 規(guī)定,，每毫克毛發(fā)中 11-nor-9-羧 基-?9 -四氫大ma酚 (THC-COOH) 的確認(rèn)性 臨界濃度為 0.0002 ng[2],。使用足夠靈敏 的特定分析流程對(duì)毛發(fā)中的藥物進(jìn)行檢測(cè) 和定量非常重要，這同時(shí)也是工作流程中 的瓶頸,。這對(duì)毛發(fā)中的低濃度大麻素尤其 重要,。免疫分析測(cè)試已得到廣泛應(yīng)用，但 在靈敏度,、選擇性和成本方面仍然存在 挑戰(zhàn),。
色譜測(cè)定具有更高的特異性，可選擇作為 毛發(fā)中大麻素的確定方法,，提供良好的檢 測(cè)限 (LOD) 和定量限,。靈敏的免疫分析和 氣相色譜測(cè)定具有更高的特異性，是確 定毛發(fā)中大麻素的不錯(cuò)選擇,，可提供較 低的 LOD 和定量限 (LOQ),。使用靈敏的 免疫分析、電子電離 (EI) 氣相色譜/質(zhì)譜 (GC/MS),、負(fù)化學(xué)電離 (CI) GC/MS,， 以及氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜 (GC/MS/MS) 檢 測(cè)毛發(fā)中大麻素的方法已有報(bào)道，其限值 僅為 SoHT 要求的 1/100–1/20,，但需要 進(jìn)行衍生化步驟[3–10],。
使用 LC/MS/MS 方法大的優(yōu)勢(shì)在于無 需衍生化，且該方法可用于篩查和確認(rèn) 性測(cè)試,。然而,，與 GC/MS/MS 法相比， LC/MS/MS 法在大麻代謝物的檢測(cè)和定 量方面存在不足,，GC/MS/MS 在達(dá)到 檢測(cè)*可提供豐度高的信號(hào),。這一 局限性終會(huì)因毛發(fā)基質(zhì)的復(fù)雜性而在 LC/MS/MS 技術(shù)中產(chǎn)生，并觀察到離子 抑制,。僅在臨界濃度或更低濃度下的代謝 物才會(huì)產(chǎn)生明顯的上述效應(yīng),。表 1 列出 了目標(biāo)分析物的特征。
實(shí)驗(yàn)部分：
材料和試劑 使用的材料如下： • Agilent Captiva EMR-Lipid 過濾柱,， 3 mL,，300 mg（部件號(hào) 5190-1003）， 用于處理 40 mg 毛發(fā),，以及 1 mL,， 40 mg（部件號(hào) 5190-1002）或 96 孔板（部件號(hào) 5190-1000）， 用于處理 25 mg 毛發(fā) • Vac Elut 20 真空萃取裝置,， 帶 16 × 100 mm 試管收集架 （部件號(hào) 12234103） • Agilent InfinityLab Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 3.0 × 150 mm, 1.9 µm （部件號(hào) 693675-312）,， Poroshell 120 Phenyl-Hexyl, 3 × 5 mm, 1.9 µm, UHPLC 保護(hù)柱 （部件號(hào) 823750-943） • Agilent 1290 Infinity II 在線過濾器， 0.3 µm（部件號(hào) 5067-6189） 使用的化學(xué)品如下： • 羧基-THC 和 羧基-THC-d3 標(biāo)準(zhǔn)品分 別購自 Cerilliant 和 LGC • GC 級(jí)正己烷和乙酸乙酯 (EtOAc),，以 及 LC/MS 級(jí)甲醇 (MeOH) 均購自 J.T. Baker • ACS 級(jí)氫氧化鈉 (NaOH) 和乙酸購自 Merck/Sigma • 超純水購自 Milli-Q
標(biāo)樣和溶液：
• 氫氧化鈉 1 mol/L（毛發(fā)消解溶 液）：稱取 NaOH (4 g) 置于燒杯中,。 用 50 mL 水溶解后,，將溶液轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶中。用少量水洗滌 燒杯 2–3 次,。將溶液超聲處理 1 分 鐘,，然后用水標(biāo)定至容量瓶刻度。將 溶液保存在帶塑料蓋的瓶中 注意：當(dāng)水加入氫氧化鈉時(shí)會(huì)釋放熱量,。 • 正己烷和 EtOAc (9:1 v/v)（毛發(fā)萃取 溶劑）：將 90 mL 己烷和 10 mL 乙酸 乙酯混合均勻 • MeOH/水 (80:20 v/v)（Captiva EMR-Lipid 溶劑）：將 80 mL 甲醇和 20 mL 超純水混合均勻 • 內(nèi)標(biāo) (IS) ― 羧基-THC-d3：用 MeOH 配制含 8 ng/mL 羧基-THC-d3 的 IS 溶液,，相當(dāng)于基質(zhì)中 8 ng/g • 校準(zhǔn)曲線標(biāo)樣 ― 羧基-THC (CCS)： 用 MeOH 配制濃度分別為 0.15、 0.2,、0.4,、0.8、1.6 和 3.2 ng/mL 的 六個(gè)校準(zhǔn)標(biāo)樣 • 質(zhì)量控制 (QC) 溶液（羧基-THC）：用 0.2 ng/mL 的溶液對(duì)批次進(jìn)行質(zhì)量控 制,。在開始分析之前,，將 0.04 ng/mL 的溶液進(jìn)樣至 LC/MS/MS 中評(píng)估系 統(tǒng)適用性
樣品前處理方法：依次用水、丙酮和二氯甲烷 (DCM) 對(duì)毛 發(fā)樣品進(jìn)行 1 分鐘的渦旋清洗,。干燥毛發(fā) 并將其剪成小塊,。隨后，樣品前處理方法 包括四個(gè)階段：1) 毛發(fā)消解和預(yù)凈化,， 2) 液液萃取 (LLE),，3) Captiva EMR-Lipid 凈化，以及 4) LC/MS/MS 進(jìn)樣,。