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AB液質聯(lián)用儀分析酸性農藥的實驗方法（負離子模式）
閱讀：2227 發(fā)布時間：2020-1-8色譜流動相的制備： 1M甲酸銨溶液：稱取63g甲酸銨,，溶于1L HPLC級的水中。 流動相A：在1L水(HPLC級) 中加入5mL 1M甲酸銨溶液,。 流動相B：在1L甲醇(HPLC級) 中加入5mL 1M甲酸銨溶液,。
樣品制備（水果與蔬菜基質） 基于Anastassiadies等人提出的方法[1] ：
1. 稱量10g切碎的樣品；
2. 加入100µL 內標溶液(D5-Atrazine 1µg/mL),；
3. 加入10mL乙腈,，劇烈振搖；
4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl,；
5. 馬上渦旋混合,，以防止MgSO4共聚物的生成；
6. 振搖30s后,，4300r/min離心5min,；
7. 取出1mL初提液，轉移至含有150mg無水MgSO4的離心管中,；
8. 混合,，5200r/min 離心1min；
9. 取出500µL上清液,，用水稀釋到1mL,，得到提取液濃度約為0.5g/mL。
基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3] ：
1. 在5g或10g樣品中,，加入水到10mL,；
2. 加20mL甲醇，使用 UltraTurrax 組織勻漿機勻漿2min；
3. 有時需要過濾或離心,；
4. 加入NaCl溶液 (100mL水中含20g NaCl),，每6mL加入NaCl溶液2mL；
5. 用5mL樣品溶液浸泡ChemElut柱,；
6. 5min后,，用16mL二氯甲烷洗脫；
7. 40℃揮發(fā)至干,；
8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL,，水1mL) 重新溶解；
9. 用0.45µm濾膜過濾,。
基于Lehotay et al. [4] 提出的方法：
1. 使用Molinex 混合器或類似設備勻質水果或蔬菜樣品,；
2. 加入乙腈，(15.0 ± 0.05)g 勻質的樣品加乙腈15mL,，超聲波提取2min后,，混旋5min；
3. 加入6g 無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物,，劇烈振搖1min,；
4. 3000r/min 離心5min；
5. 取5mL上層溶液,，加入1.8g 無水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附劑,；
6. 振搖20s；
7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀,，或類似設備揮發(fā)至干,；
8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解樣品；
9. 12000r/min高速離心2min,；
10. 上清液轉入自動進樣器的進樣瓶中備用,。
樣品制備(糧食) [5]
1.稱取10 g試樣(精確至0.01 g)與10 g硅藻土混合，移入加速溶劑萃取儀的34mL萃取池中,，在10.34MPa 壓力,、80℃條件下，加熱5min,，靜態(tài)萃取3min,，循環(huán)兩次，然后用池體積60%的乙睛(20.4mL)沖洗萃取 池,，并用氮氣吹掃100 s,。萃取完畢后，將萃取液混勻,，對含油量較小的樣品取萃取液體積的1/2(相當于5 g 試樣量),，對含油量較大的樣品取萃取液體積的1/4(相當于2.5g試樣量),，待凈化。
2.對A,B,C,D組農藥:將Envi-18柱放入固定架上,，加樣前先用10mL乙睛預洗柱,，下接梨形瓶，移入上述 萃取液,，并用15mL乙睛洗脫,，在旋轉蒸發(fā)器上將洗脫液濃縮至約1mL，備用,。
3.對E組農藥:將上述萃取液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至約1mL,，將Sep-Pak Alumina N柱放入下接梨形瓶 的固定架上,，加樣前先用20 mL乙睛預洗柱,，將樣品濃縮液轉移至凈化柱上，再用3×10mL乙睛洗滌樣液 瓶,，并將洗滌液移入柱中,，將洗脫液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至約1mL，備用,。
4.在Envi-Carb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉,，將該柱連接在Sep-Pak氨基柱頂部，并將串聯(lián)柱放入下 接梨形瓶的固定架上,。加樣前先用4mL乙睛+甲苯( 3+1 )預洗柱,，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將樣 品濃縮液轉移至凈化柱上,，再用3×2mL乙睛+甲苯(3+1)洗滌樣液瓶,，并將洗滌液移入柱中。在串聯(lián)柱上 加上50 mL貯液器,，用25 mL乙睛+甲苯(3+1)洗脫農藥,，收集于梨形瓶中，并在40 ℃水浴中旋轉濃縮至 約0.5 mL,。對A,B,C,D組農藥,，加入2×5mL正己烷進行溶劑交換兩次，后使樣液體積約為1mL,，將濃縮 液置于氮氣吹干儀上吹干,，并迅速用乙睛+水(3+2)定容1mL，混勻,，用于液相色譜—串聯(lián)質譜測定,。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動進樣器,、柱溫箱,。 色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱,，50mm×2mm，粒徑 4µm,。流動相：A相—水 + 5mM 甲酸銨,；B相—甲醇 + 5mM 甲酸銨。
MS/MS檢測：API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質分析系統(tǒng),；TurboIonSpray ® 離子源,，負離子模式，MRM掃描 方式,。
