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三重四級桿液質(zhì)測定動物源性食品中硝基咪唑類藥物
閱讀：1182 發(fā)布時(shí)間：2019-12-27摘要：本應(yīng)用簡報(bào)采用 Captiva EMR-Lipid 對雞肉、豬肉和豬肝樣品中的 7 種硝基咪唑類藥物進(jìn) 行萃取凈化后,，在安捷倫三重四級桿液質(zhì)上進(jìn)樣分析,。前處理過程簡單、快速并且分析結(jié) 果符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求的檢測限與定量限,，以及可接受的加標(biāo)回收率,。
前言：硝基咪唑類藥物是一類抗生素和抗原蟲藥，主要用于預(yù)防和治療 家禽組織滴蟲病,、球蟲病以及豬出血性腸炎等疾病,，廣泛應(yīng)用于 畜禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[3]。然而這些化合物被認(rèn)為可能對人類產(chǎn)生致 癌,、致畸,、致突變作用，已被美國和歐盟國家禁止使用,。我國農(nóng) 業(yè)部將二甲硝基咪唑和甲硝唑列為允許作治療用,、但不得在動物 源性食品中檢出的獸藥,。因此，為進(jìn)一步加強(qiáng)相關(guān)食品安全問題 的監(jiān)管,，開發(fā)簡單,、準(zhǔn)確、快速檢測動物源性食品中硝基咪唑類 藥物及其代謝物的方法顯得十分必要,。本文建立了一種將 Captiva EMR-Lipid 與三重四級桿液質(zhì)相結(jié)合同時(shí)分析 動物源性食品中殘留的 7 種硝基咪唑類抗生素的方法。對 7 種硝 基咪唑類藥物的凈化和回收情況,，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)硝基咪唑類藥物在 三種前處理方法中均具有很好的保留和洗脫性能,；通過鹽析的方 法可以更好地去除極性干擾物，提高凈化效果,，配合 EMR 的方法 也能達(dá)到大限度去除脂肪的作用,。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑和樣品 甲酸、乙腈均為色譜純,，購于迪馬公司,；實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)過密理博 純水儀的二次水。 所用標(biāo)準(zhǔn)品包括甲硝唑 (MNZ),、二甲硝基咪唑 (DMZ),、洛硝噠 唑 (RNZ)、異丙硝唑 (IPZ),、羥基甲硝唑 (MNZOH),、羥甲基甲硝 咪唑 (HMMNI)、羥基異丙硝唑 (IPZOH),，上述標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于 99.0%,，購于 Dr 公司。 消耗品：Agilent Bond Elut QuEChERS,，部件號 5982-0032,； Agilent Captiva EMR-Lipid，600 mg,，6 mL,，部件號 5190-1004。 樣品為市售產(chǎn)品,。
儀器和設(shè)備：采用 Agilent 1290 Infinity 高效液相色譜系統(tǒng)與 Agilent 6470 串聯(lián) 質(zhì)譜系統(tǒng),。
標(biāo)樣前處理：取適量的 MNZ、DMZ,、RNZ,、IPZ、MHZOH,、HMMNI,、IPZOH,， 分別用甲醇配制成 100 mg/L 的單標(biāo)儲備液。然后取適量的各種 單標(biāo)儲備液,，用甲醇溶液配制成 1 mg/L 的混標(biāo)工作液,。
樣品前處理：稱取樣品 5 g，加入 3 mL 水和陶瓷均質(zhì)子,，渦旋混勻后,，加入 10 mL 乙腈和 Bond Elut QuEChERS 獸藥殘留分析萃取鹽包（部 件號：5982-0032），渦旋振蕩 5 min,；在 4 °C 下以 9000 r/min 的 轉(zhuǎn)速低溫離心 10 min,；移取 4 mL 上清液至另一離心管中，再加 入 1 mL 水,，充分混勻后,，經(jīng)過 Captiva EMR-Lipid 600 mg 過濾 柱萃取,；收集流出液,，在 40 °C 下用氮?dú)獯蹈桑⒂昧鲃酉喽ㄈ?至 1 mL,；經(jīng) Agilent Captiva 0.2 µm RC 濾膜過濾后進(jìn)行三重四級桿液質(zhì) 測定,。
色譜條件 色譜柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18 (3.0 × 100 mm, 2.7 µm) 柱溫： 30 °C 進(jìn)樣體積： 5 µL 流動相 A： 水相（含 0.1% 甲酸） 流動相 B： 乙腈（含 0.1% 甲酸） 流速： 0.4 mL/min 梯度程序： 時(shí)間 (min) B% 0.00 10.00 1.00 10.00 5.00 50.00 7.00 95.00 9.00 95.00 9.10 10.00 后運(yùn)行： 3 min
質(zhì)譜條件 離子源： 采用 AJS ESI，MRM 監(jiān)測模式 干燥氣溫度： 250 °C 干燥氣流速： 7 L/min 霧化器壓力： 40 psi 鞘氣溫度： 325 °C 鞘氣流速： 11 L/min 毛細(xì)管電壓： 4000 V 噴嘴電壓： 0 V 本研究所涉及的各種分析物的質(zhì)譜參數(shù),。
結(jié)果與討論 Captiva EMR-Lipid 的選擇 本研究考察了 QuEChERS,、QuEChERS EMR 和 Captiva EMR-Lipid 對 7 種硝基咪唑類藥物的回收情況，僅有 MNZ-OH 極性較強(qiáng),， 易產(chǎn)生大量極性干擾,，導(dǎo)致相應(yīng)抑制，其它六種硝基咪唑類藥物 在三種前處理方法中均具有很好的保留和洗脫性能,。終通過 鹽析的方法可以更好地去除極性干擾物,，提高凈化效果，配合 EMR 的方法也達(dá)到大限度去除脂肪的作用,。因此方法配合使用 QuEChERS 獸藥萃取鹽包和 Captiva EMR-Lipid 來完成對 7 種硝基 咪唑類藥物的分析,。
線性范圍與檢測限：本方法采取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。MNZ,、DMZ,、RNZ、IPZ,、 MHZOH,、HMMNI、IPZOH 在濃度 0.5–10 ng/mL 范圍內(nèi)線性相 關(guān),，且線性相關(guān)系數(shù)均高于 0.99,。 在 S/N > 3 和 S/N > 10 的信噪比下,，測得 7 種硝基咪唑類藥物在 雞肉、豬肉和豬肝中的檢測限為 0.5 µg/kg,，定量限為 1 µg/kg,， *可以滿足我國標(biāo)準(zhǔn)方法中硝基咪唑藥物檢測限和定量限的要 求，具體檢測限和定量限數(shù)據(jù)列于表 2 中,。
加標(biāo)回收率與精密度 取空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收和精密度實(shí)驗(yàn),，向空白雞肉、豬肉和豬 肝中添加 1 μg/kg,、2 μg/kg,、5 μg/kg 三個(gè)濃度水平的混標(biāo)。在不 同加標(biāo)濃度下得到的雞肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 71.9%–111.0% 之間,，豬肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 79.1%–112.7% 之間，豬肝基 質(zhì)中的加標(biāo)回收率在 69.9%–114.7% 之間,。雞肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收 率相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 小于 10.0%,，豬肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率 RSD 小于 9.8%，豬肝基質(zhì)中的加標(biāo)回收率 RSD 小于 10.8%,。
結(jié)論：本文建立了 Captiva EMR-Lipid 結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定動物源 性食品中 7 中硝基咪唑的殘留的分析方法,。方法靈敏度滿足 和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)對于食品中硝基咪唑藥物大殘留*的要求[1,2]。方 法采用 Captiva EMR-Lipid 大程度去除脂肪,，并且中簡單易操 作,，大大減少了常規(guī) SPE 時(shí)間消耗。