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分析四環(huán)素類藥物的實(shí)驗(yàn)方法
閱讀：1765 發(fā)布時(shí)間：2019-10-25樣品制備（蜂蜜）基于GB/T 18932.23-2003方法[1]：
1．稱取6 g試樣(到0.01 g)置于150mL三角瓶中,，加入30mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液于液體混勻器上快速混合1min,，使試樣*溶解。樣液倒入50mL離心管中,，以3000r/min離心5min,，待凈化。
2．將上清液移至下接Oasis HLB柱的貯液器中,，以小于3mL/min通過Oasis固相萃取柱后,，用5mL甲醇+水洗柱，棄去全部流出液,。在65 kPa的負(fù)壓下抽干20min,，后用15mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于100mL圓底燒瓶中,。
3．按上述方法使洗脫液在減壓情況下以小于3mL/min的流速通過陰離子交換柱,待洗脫液全部流出后,，用5mL甲醇洗柱，棄去全部流出液,。在65 kPa負(fù)壓下抽干5min,再用4mL流動(dòng)相洗脫,，收集洗脫液于5mL樣品管中，定容至4mL,，供測(cè)定,。
四環(huán)素類藥物
四環(huán)素類(TCs)為廣譜抗菌藥,，主要有以下四種：
樣品制備(肉類)
稱取5.0 g肌肉組織均質(zhì)樣品，置于50mL離心管中,，加入0.75%高氯酸溶液10mL，均質(zhì)30 s,，振蕩提取3min,，以4000 r/min離心10min，取上清液于試管中,，再重復(fù)提取一次,，合并上清液于試管中。加正己烷1mL,，振蕩1min,，離心，除去正己烷層,。水相過ODS-C18 柱（預(yù)先用5mL甲醇,、2mL EDTA-Na2溶液和5mL去離子水洗過）凈化，用10mL蒸餾水洗雜質(zhì),，氮?dú)獯蹈芍?，?/span>1mL含4%甲酸的甲醇溶液以1mL/min洗脫，洗脫液用于測(cè)定,。
注意事項(xiàng)：
1,、標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解配置儲(chǔ)備液，使用前用流動(dòng)相稀釋到濃度為1µg/mL左右,。
2,、因四環(huán)素和強(qiáng)力霉素為同分異構(gòu)體，[M+H]
+均為 m/z 445,，需要分別優(yōu)化條件,，而且優(yōu)化源參數(shù)
時(shí)，也應(yīng)分別進(jìn)樣,，確定各自的保留時(shí)間,，并要求基線分離，另外2種不必基線分離,。
3,、梯度洗脫后進(jìn)下一針樣品時(shí)一定要充分平衡。
4,、用空白提取液配制同樣濃度標(biāo)樣,，按相同方法進(jìn)樣，觀察色譜峰形及保留時(shí)間是否合適,，峰高有
色譜分離條件
Agilent 1100系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng),、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器,、柱溫箱。
水相：5mmol/L 甲酸水溶液,；有機(jī)相：乙腈,。水相/有機(jī)相＝2/8，等度洗脫,?；蛄鲃?dòng)相：乙睛+甲醇
+0.4 %甲酸溶液(18+4+78)。流速：200µL/min,。
色譜柱：C18,，3µm，150mm×2.0mm,。
柱溫箱溫度：25℃,；進(jìn)樣體積：20µL。
參考文獻(xiàn)：
1Tetracycline Residues in Honey (HPLC-MSD Method) ACC-042-V1.1,Canada.
2Official Method of Analy sis of AOAC International 17th Edition (2000) Appendix D, Appendix E.
3 蜂蜜中土霉素,、四環(huán)素,、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定方法液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法GB/T18932.23—2003.