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分析苯并咪唑藥物的實驗方法
閱讀：681 發(fā)布時間：2019-9-25MS/MS 檢測 API 4000™ LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng),，Turbo V™離子源，正離子 / 負(fù)離子模式,，MRM掃描方式,。
樣品制備（肉產(chǎn)品）[1]
1．試樣代表性部位，以搗碎機進行充分勻化,。勻化后的試樣在分析前一直冷凍保存,。
2．稱取（2.5±0.05) g均勻試樣置于離心管底部,。分別制備四份空白組織試樣及一份對照試樣,、三份 添加標(biāo)準(zhǔn)的試樣。在對照試樣中加入100 µL純DMSO,。在組織試樣中加入50 µL DMSO,。在空白組織試樣 和組織試樣中分別加入50 µL 10 µg/mL工作溶液,。然后在已加入50 µL 10 µg/mL工作溶液的三個空白組織試 樣中分別加入50 µL 20、10,、5 µg/mL工作溶液,。
3．制備的每一試樣中加入2.5 mL 6 mol/L HCl，蓋好,，將試樣管放到（110±4) ℃的烘箱內(nèi),。
4．1 h后把試樣從烘箱中取出，將試樣管放于干冰或冰上約5 min,，冷卻至室溫,。
5．向每個試樣中加入2.0 mL水，以渦式混勻器混勻試樣,，用pH計監(jiān)測pH值,。慢慢加入足量(約1.23 g) 的碳酸鈉，加入時間需4～5 min,，調(diào)節(jié)pH至8～9.5,。
6．向每個試樣內(nèi)加入15 mL乙酸乙酯，蓋上塞子,，平放于試管架上,，振搖5 min。然后取下塞子,，于 4000 r/min將試樣離心5 min,。
7．用吸移管將乙酸乙酯提取液轉(zhuǎn)入另一50 mL玻璃離心管內(nèi)，應(yīng)盡量轉(zhuǎn)移*,。
8．重復(fù)操作步驟6和7,，再次提取每個試樣，把相應(yīng)的提取液合并于各自的50 mL離心管內(nèi),。
9．向每個合并的乙酸乙酯提取液中加入4.0 mL 1 mol/L HCl,，蓋上塞子，平放于試管架上振搖5 min,。取 下塞子于4000 r/min離心5 min,。
10．盡量*吸去乙酸乙酯相。在（35±5) ℃水浴上蒸去水溶液上殘留的乙酸乙酯,。
11．用渦式混勻器將試樣混勻,，同時慢慢加入足量(約0.33 g)碳酸鈉，加入時間需1～2 min,。用pH計 監(jiān)測pH值,，每個試樣的pH值應(yīng)為8～9.5。
12．每個試樣中加入20 mL甲苯，蓋上塞子平放于試管架上振搖5 min,，取下塞子于4000 r/min離 心5 min,。
13．盡量*吸去甲苯相。在（35±5) ℃的水浴上蒸去水相上殘留的甲苯,。
14．對于每一個試樣,，相對應(yīng)將一10 mL玻璃注射器用夾子固定在環(huán)形架上。注射器的路氏接頭前端 連接SEP-PAK C18柱體,。
15．將每支柱用2 mL甲醇預(yù)洗,，而后用2 mL 0.2 M磷酸鉀緩沖溶液(pH 8.0)洗滌。加入每種試劑后,， 經(jīng)過安裝于注射器頂部的橡皮塞緩緩?fù)ㄈ氲獨?，?dāng)?shù)獨忾_始出柱時即停氣。氮氣流速1～2 mL/min,。棄去 洗脫液,。
16．從步驟13中得到的每一試樣水相轉(zhuǎn)入預(yù)先洗滌好的各注射器柱系統(tǒng)內(nèi)。用步驟14的方法,，應(yīng)用 氮氣使溶液流經(jīng)柱體洗提,，然后各取每一試樣管水洗液1 mL(經(jīng)渦式混勻器混勻)，使用巴氏吸移管采用類 似方法將水洗液分別轉(zhuǎn)入各注射器柱系統(tǒng)內(nèi),棄去洗脫液,。
17．再取每個試樣管水洗液1 mL(經(jīng)渦式混勻器混勻),，分別轉(zhuǎn)入各注射器柱系統(tǒng)內(nèi)，按步驟15的方 法應(yīng)用氮氣使此水洗液流經(jīng)柱體洗提,棄去洗脫液,。
18．向每一注射器柱系統(tǒng)內(nèi)分別加入2 mL甲苯,，按步驟15的方法用氮氣使甲苯流經(jīng)柱體洗提，棄去 洗脫液,。
19．在每一注射器柱系統(tǒng)下面分別放置一15 mL離心管,，向每個柱系統(tǒng)內(nèi)加入2 mL乙酸乙酯，按步驟 15的方法用氮氣使乙酸乙酯流經(jīng)柱體進行洗脫,。在這部分洗脫液中含有待測化合物,。
20．向步驟19中得到的每份洗脫液中分別加入約0.5 mL甲醇，混勻,，得到均勻的溶液,。
21．至干后加入0.5 mL水 — 甲醇溶液(70＋30),，混勻,，重新溶解殘渣。
22．30 min后將每個重新溶解的試樣加入微量過濾裝置內(nèi),，采用0.2 µm濾膜過濾,。然后將每個過濾器 及試樣提取液于4000 r/min離心5～10 min。
23．將濾液轉(zhuǎn)入15 mL具塞玻璃離心管內(nèi),，用水 — 甲醇(70＋30)調(diào)節(jié)每一濾液體積為0.5 mL,?；靹蚝?移取0.1 mL供分析。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng),、G1367A型自動進樣器,、柱溫箱。 色譜柱：Inertsil ODS-3 150 mm×2.1 mm,。 流速：200 µL/min,。 流動相：水 / 甲醇 + 5 mM 甲酸銨（pH=4.0）。 柱溫箱溫度：25 ℃,；進樣體積：20 µL,。MS/MS 檢測 API 4000™ LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)
