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戴安離子色譜分離脈沖積分安培檢測器測定果糖二磷酸鈉及其有關物質(zhì)
閱讀：693 發(fā)布時間：2019-9-12引言
果糖二磷酸鈉注射液是一種治療低磷酸血癥的藥物,，臨床上常用作心肌 缺血輔助治療藥。低磷酸血癥可在急性情況,，如輸血,、體外循環(huán)下進行手術 和胃腸外營養(yǎng)時出現(xiàn)，也與一些慢性疾病,，如慢性酒精中毒,、長期營養(yǎng)不 良、慢性呼吸衰竭中碳酸耗竭有關[1],。果糖二磷酸鈉注射液在臨床中的應用很 廣泛,，但由于其本身的結(jié)構特點，果糖二磷酸鈉的測定多采用衍生后紫外分 光光度法,；同時在果糖二磷酸鈉的生產(chǎn)過程中可能會引入雜質(zhì),，其有關物質(zhì) 有磷酸果糖,、磷酸葡萄糖和果糖等，這幾種雜質(zhì)都是強極性化合物,，而且含 量很低,，在普通反相色譜和示差檢測器中無法檢測。有文獻報道采用紙電泳 法分離苯二胺顯色后檢測的方法,，以及薄層色譜法*檢測[2-4],，也有文獻采 用固體復合酶法測定果糖二磷酸鈉的含量[5]。這幾種方法不僅操作繁瑣,，且重 復性和靈敏度存在問題,。
本實驗采用戴安離子色譜脈沖安培法分離測定果糖二磷酸鈉和3種有關物質(zhì)， 分離度好,，靈敏度高,，操作簡便。建立了一種有效檢測果糖二磷酸鈉及其有 關物質(zhì)的方法,。
測試條件
儀器：戴安ICS-5000離子色譜儀（Thermo?sher公司）,，配四 元梯度泵，ED安培檢測器,，AS-AP自動進樣器 色譜柱：CarboPac PA 20保護柱6.0 µm, 50×3 mm,，（ P/N: 060144） CarboPac PA 20分離柱6.0 µm, 150×3 mm，（ P/N: 060142） 柱溫：30 ℃,； 淋洗液：NaOH/ NaOAc梯度淋洗 流速：0.4 mL/min,； 定量環(huán)：20 µL；
檢測方式：脈沖積分安培檢測（四電位波形）
樣品前處理
樣品稀釋適當倍數(shù)后,，經(jīng)過0.22 µm尼龍濾膜過濾,， 取續(xù)濾液直接上機分析。
結(jié)果和討論
色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
果糖二磷酸鈉的結(jié)構中含有兩個磷酸基團,，可以采用 陰離子交換色譜法對其進行分離,。同時其有關物質(zhì)為 磷酸果糖,、磷酸葡萄糖和果糖,，這些結(jié)構中均含有羥基， 能夠在安培檢測器上有信號,。為了保證色譜峰的分離度和 保留時間的合理性,，我們選擇CarboPac PA 20的糖柱和 NaOH/NaOAc梯度淋洗的方式。 在上述色譜條件下幾種 物質(zhì)的色譜圖如下圖（圖1）,。
重現(xiàn)性,、線性和靈敏度
吸取果糖、磷酸葡萄糖,、磷酸果糖和果糖二磷酸質(zhì) 量濃度為1.0 mg/L的混合標準溶液,，重復進樣10次,，記 錄色譜圖，它們保留時間的相對標準偏差分別為0.41%,、 0.57%,、0.53%，峰面積的相對標準偏差分別為1.60%,、 1.14%,、1.46%，峰高的相對標準偏差分別為0.54%,、 0.64%,、0.62%，重現(xiàn)性較好,。
將標準品定量混合并將標準品溶液稀釋得到一濃度 系列,，對上述系列濃度各測定3次后, 取其峰面積的平均 值，以峰面積為縱坐標,，標準液質(zhì)量濃度為橫坐標建立標 準工作曲線,，各種物質(zhì)的線性范圍如表1, 相關系數(shù)都在 0.9997～0.9998之間。以信噪比（S/N）為3計算檢出限,， 果糖,、磷酸葡萄糖、磷酸果糖和果糖二磷酸的檢出限依次 為0.010,、0.010,、0.020和0.10 mg/L。
實際樣品分析
市售果糖二磷酸鈉注射液,，稀釋后經(jīng)過0.22 µm濾膜 過濾,，按選定的色譜條件進行測定，外標法定量,，其譜 圖見圖2,，分析結(jié)果見表2。
結(jié)論
離子色譜分離脈沖安培檢測器測定果糖二磷酸鈉及 其有關物質(zhì)果糖,、磷酸葡萄糖和磷酸果糖的方法操作簡 便,，重復性好，線性范圍內(nèi)相關性好,，準確度高,。同時 果糖二磷酸和三種有關物質(zhì)相比靈敏度較低，在進行含 量測定時,，無需較大稀釋倍數(shù),，可以減小由于稀釋倍數(shù) 過大引入的誤差。該方法可同時進行含量測定和有關物 質(zhì)分析,，具有較高的實用價值,。