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島津推出遺傳毒性雜質(zhì)NMBA---LC-MS/MS解決方案
閱讀：1125 發(fā)布時間：2019-7-12019年3月1日，美國食品和藥物管理局(FDA)在發(fā)布血管緊張素II受體阻滯劑（ARBs）藥物氯沙坦的自愿召回公告,，涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產(chǎn)的87批氯沙坦鉀片,，而導(dǎo)致該召回的主要原因是發(fā)現(xiàn)其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)。由于NMBA是已知動物和潛在人類的致癌化學(xué)物質(zhì),，是繼N−亞硝基二jia胺（NDMA）和N−亞硝基二乙胺（NDEA）之后上市ARBs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質(zhì),。此后，F(xiàn)DA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品,，其原因為檢出含有NMBA,。同時，加拿大衛(wèi)生部（HC）及英國衛(wèi)生部（DHSC）也在上發(fā)布了氯沙坦類藥物的召回公告,。直至2019年6月12日,，Teva Pharmaceuticals仍在擴大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片，可見藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)仍受到公眾及藥品監(jiān)管機構(gòu)的高度關(guān)注,。
在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質(zhì)限度表中,，NMBA的日允許攝入量大值為0.96ppm。 FDA評估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平,，表明6個月的暴露量不會存在患癌風(fēng)險,。
N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4
因此，為了確?；颊咴诰彌_期可獲得氯沙坦類藥物,，F(xiàn)DA不反對含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期FDA設(shè)為6個月,，直至生產(chǎn)企業(yè)提供亞硝胺雜質(zhì)符合要求的氯沙坦藥物來填補市場,。
目前，關(guān)于氯沙坦鉀中NMBA的檢測方法尚未見公開報道,，為及時應(yīng)對市場檢測需求,，島津中國推出了基于LC-MS/MS技術(shù)的檢測方法，該方法操作簡單,，靈敏度高,，適用性強,，可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測。
1,、 實驗部分
1.1 儀器： LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用儀,，含有：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5R在線脫氣機,，SIL-30AC自動進樣器,，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器,，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀,，LabSolutions（Version 5.82 SP1）色譜工作站。
1.2 分析條件：
液相色譜條件
| 色 譜 柱 | ：Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm | ||
| 流 動 相 | ：A相-0.1%甲酸水溶液,；B相-甲醇 | ||
| 流 速 | ：0.3 mL/min | 柱溫 | ：40℃ |
| 進樣體積 | ：2 µL | 洗脫方式 | ：梯度洗脫 |
質(zhì)譜條件
| 離子化模式 | ：ESI,，正離子檢測 | 碰撞氣 | ：氬氣 270 kPa |
| 霧化氣流速 | ：3.0 L/min | 加熱模塊溫度 | ：400℃ |
| 加熱氣流速 | ：10.0 L/min | 干燥氣流速 | ：10.0 L/min |
| 接口溫度 | ：300℃ | 掃描模式 | ：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) |
| DL溫度 | ：250℃ | MRM參數(shù) | ：見下表 |
1.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：取NMBA標(biāo)準(zhǔn)貯備液，以純甲醇逐級稀釋為0.5,、1,、2、5,、10,、20、50,、100 ng/mL的八個不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,。
1.4 樣品溶液：取氯沙坦鉀三批原料藥（符合EP9.0）0.1 g于10 mL容量瓶中，加甲醇適量,，超聲1 min至全部溶解,，放冷至室溫，用甲醇定容待測,。
2,、 結(jié)果
2.1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
圖1. NMBA標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（100 ng/mL）
（黑色-總離子流；粉色-MRM147.15/117.10,；藍色-MRM147.15/87.10,；棕色-MRM147.15/44.10）
2.2 線性關(guān)系及檢出定量限
圖2. NMBA標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢出限（LOD）0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10)，定量限（LOQ）1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)
2.3 精密度實驗：10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本連續(xù)進樣,，日內(nèi)及日間保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.1%,，峰面積低于1.10%,。
2.4 加標(biāo)回收實驗
取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中,，加入NMBA標(biāo)準(zhǔn)品溶液(相當(dāng)于50、100,、200 ng NMBA標(biāo)準(zhǔn)品),，按照1.4中的方法進行處理,，上機分析。加標(biāo)的氯沙坦鉀溶液色譜圖（以200 ng加標(biāo)量為例）見圖3,。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%,，94.40%，95.61%,。
圖3 NMBA加標(biāo)量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖
2.5 檢測結(jié)果：三批樣品中NMBA均低于小檢出限（LOD）,。
3、 結(jié)論
本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)的方法,，在0.5~100 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,，檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進行了測定,，結(jié)果為NMBA未檢出,。本方法簡單、快速,、靈敏,、準(zhǔn)確，可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測,。