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TSQ Altis三重四極桿對血漿中候選藥物混合物進行靈敏的定量分析
閱讀：818 發(fā)布時間：2019-5-21目的：為檢測和定量人血漿中目標制劑混合物開發(fā)一種靈敏、耐用和可重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析 方法
前言：在大多數(shù)制藥企業(yè)中,，小分子候選藥物作為新化學實體或仿制藥,，占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例。目標定量分析是工作流程的一個關鍵組成部分,，其要求成功開發(fā)出 小分子藥物,。而這些目標定量分析必須在生物基質(zhì)中完成，因此,，常常帶來分析挑戰(zhàn),。 在本項研究中，我們報道了為大鼠血漿中多個藥物標準品開發(fā)的靈敏,、耐用,、可靠和可 重現(xiàn)的 LC-MS/MS 分析方法。
實驗：樣品制備 采用乙腈（ACN): 血漿 =3:1 破壞血漿,，從而制備已破壞的血漿 儲備液,。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘。去除上 清液,，并加入等體積的水,，終得到已破壞血漿的儲備原液。 將已破壞血漿儲備混合液中每種標準化合物濃度為 1 mg/mL 的 儲備液稀釋至
1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL,。將同位 素標記的內(nèi)標化合物加入到每個校正水平上,，從而得到終濃 度為 0.5ng/mL 的內(nèi)標溶液。所有試劑均購自 Cerilliant 公司（朗 德羅克,，得克薩斯州）,，濃度為 1 mg/mL 的甲醇溶液。
液相色譜法：采用 Thermo ScientificTM VanquishTM Horizon HPLC 系統(tǒng) 進行色譜分離,。所使用的色譜柱為 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 極性封端 LC 色譜柱（100 × 2.1 mm,，1.9 µm 粒徑）。流動相 A 和 B 分別為 10 mM 甲 酸銨水溶液（采用 Fisher ChemicalTM OptimaTM 級純水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液,。柱溫為 50 ℃,。總運行時間為 3.5 分鐘（表 1）,。
質(zhì)譜分析法 采用 Thermo ScientificTM TSQ AltisTM 三重四極桿質(zhì)譜儀進行質(zhì) 譜分析,，配置 Thermo ScientificTM OptaMaxTM NG 離子源室,。 表 2 和表 3 顯示了實驗設置中使用的質(zhì)譜儀離子源和 SRM 參 數(shù)。
數(shù)據(jù)分析 采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 軟件采集并處理數(shù)據(jù),。
結(jié)果與討論：研究發(fā)現(xiàn),，采用 TSQ Altis MS 測得的每個候選藥物的定量下限 （LLOQ）明顯低于采用以前幾代 MS 系統(tǒng)的測量值（表 4）。 此外,，內(nèi)標化合物的 %CV 值顯著降低也意味著 TSQ Altis 質(zhì)譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu),。300 pg/mL QC 2 的典型色譜圖見圖 1。 QC 線性和重現(xiàn)性的更多詳細信息見表 5
