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低分子肝素（low-molecular-weight heparin,， LMWH） 是近年發(fā)展起來的新一代肝素類抗血栓藥物,， 其抗血栓作用優(yōu)于肝素，而抗凝血作用低于肝素,，且具有 皮下注射吸收良好,、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長,、出血 傾向小等優(yōu)點,，目前已廣泛應(yīng)用于臨床,。根據(jù)LMWH的來 源、生產(chǎn)工藝,、末端結(jié)構(gòu)的不同,，LMWH 分為許多不同 的種類，如達替肝素鈉,、依諾肝素鈉,、那曲肝素鈣、帕米 肝素鈉,、汀肝素鈉等,。達替肝素鈉（Dalteparin Sodium） 是低分子肝素的一種，由亞硝酸降解肝素得到,，重均分子 量5600～6400,，峰位分子量6000，硫酸化程度為2.0～ 2.5/雙糖單位

本實驗使用陰離子交換色譜法測定游離硫酸根含 量,，靈敏度高,、選擇性好、快速,。

測試條件
儀器：戴安ICS 1500離子色譜儀,； 分析柱：IonPac AS11，250×4mm,； 保護柱：IonPac AG11,，50×4mm； 柱溫：30℃,； 淋洗液：3. 0 mmol/L 碳酸鈉溶液,； 流速：1.50 mL/min； 定量環(huán)：25 µL 抑制器：ASRS300 4 mm,，自循環(huán)模式，電流為23 mA
檢測方式：抑制型電導

 

樣品前處理
精密稱取達替肝素鈉20 mg,，加水溶解并稀釋至 10 mL,，過0.22 µm濾膜。

 

結(jié)果和討論
樣品濃度的選擇
達替肝素鈉為多糖,，在實驗條件下保留在色譜柱上,， 不能被洗脫。樣品濃度為2 mg/mL時,，連續(xù)進樣10次,，硫 酸根保留時間可提前0.3 min。為提高實驗的穩(wěn)定性,，延 長色譜柱使用時間,，可在滿足定量限的前提下,，適當降低 達替肝素鈉的濃度。

 

色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
樣品中盡含有氯離子和硫酸根離子,，非常易于分離,。 本實驗選用IonPac AS11色譜柱、3.0 mmol/L碳酸鈉溶液 作為淋洗液,，操作簡單,。

重現(xiàn)性、線性和靈敏度
取達替肝素鈉樣品,，平行處理六份,，在選定的色譜 條件下進行分離分析，硫酸根的重現(xiàn)性較好,，峰面積,、 保留時間、峰高的相對標準偏差（RSD）均低于5%,。 選擇一個樣品重復六次進樣,，硫酸根的保留時間、峰面 積和峰高的相對標準偏差（RSD）均低于5%,，其結(jié)果 見表1,。

 

在選定色譜條件下配制適宜濃度范圍的離子標準曲 線，硫酸根在0.1~40 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,， 其線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995,。在本實驗條件下，基線噪音 約為1.0 nS,，根據(jù)三倍基線噪音計算出方法對硫酸根的定 量限為31.7 µg/L,，折合樣品中硫酸根含量0.00015%。

 

實際樣品分析及加標回收
取達替肝素鈉樣品測定并進行加標實驗,，硫酸根的 加標回收率依次在99~102%之間,。樣品檢測結(jié)果見表2。

 

結(jié)論
采用本方法可以方便,、快捷,、準確檢測達替肝素鈉 中的硫酸鹽，操作較為簡單,，方法重現(xiàn)性較好,，結(jié)果可 靠。本實驗所使用的色譜柱AS11同時可用于肝素鈉其它 檢測項目如多硫酸軟骨素等項目的檢測