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技術(shù)文章

達(dá)替肝素鈉中硫酸根的測(cè)定

閱讀:1451          發(fā)布時(shí)間:2019-5-6

低分子肝素(low-molecular-weight heparin,, LMWH) 是近年發(fā)展起來的新一代肝素類抗血栓藥物, 其抗血栓作用優(yōu)于肝素,,而抗凝血作用低于肝素,,且具有 皮下注射吸收良好、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長,、出血 傾向小等優(yōu)點(diǎn),,目前已廣泛應(yīng)用于臨床。根據(jù)LMWH的來 源,、生產(chǎn)工藝,、末端結(jié)構(gòu)的不同,LMWH 分為許多不同 的種類,,如達(dá)替肝素鈉,、依諾肝素鈉、那曲肝素鈣,、帕米 肝素鈉,、汀肝素鈉等。達(dá)替肝素鈉(Dalteparin Sodium) 是低分子肝素的一種,,由亞硝酸降解肝素得到,,重均分子 量5600~6400,峰位分子量6000,,硫酸化程度為2.0~ 2.5/雙糖單位

本實(shí)驗(yàn)使用陰離子交換色譜法測(cè)定游離硫酸根含 量,,靈敏度高、選擇性好,、快速,。

測(cè)試條件
儀器:戴安ICS 1500離子色譜儀; 分析柱:IonPac AS11,,250×4mm,; 保護(hù)柱:IonPac AG11,50×4mm,; 柱溫:30℃,; 淋洗液:3. 0 mmol/L 碳酸鈉溶液; 流速:1.50 mL/min,; 定量環(huán):25 µL 抑制器:ASRS300 4 mm,,自循環(huán)模式,電流為23 mA
檢測(cè)方式:抑制型電導(dǎo)

 

樣品前處理
精密稱取達(dá)替肝素鈉20 mg,,加水溶解并稀釋至 10 mL,,過0.22 µm濾膜。

 

結(jié)果和討論
樣品濃度的選擇
達(dá)替肝素鈉為多糖,,在實(shí)驗(yàn)條件下保留在色譜柱上,, 不能被洗脫。樣品濃度為2 mg/mL時(shí),,連續(xù)進(jìn)樣10次,,硫 酸根保留時(shí)間可提前0.3 min。為提高實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性,延 長色譜柱使用時(shí)間,,可在滿足定量限的前提下,,適當(dāng)降低 達(dá)替肝素鈉的濃度。

 

色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
樣品中盡含有氯離子和硫酸根離子,,非常易于分離,。 本實(shí)驗(yàn)選用IonPac AS11色譜柱、3.0 mmol/L碳酸鈉溶液 作為淋洗液,,操作簡單。

重現(xiàn)性,、線性和靈敏度
取達(dá)替肝素鈉樣品,,平行處理六份,在選定的色譜 條件下進(jìn)行分離分析,,硫酸根的重現(xiàn)性較好,,峰面積、 保留時(shí)間,、峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均低于5%,。 選擇一個(gè)樣品重復(fù)六次進(jìn)樣,硫酸根的保留時(shí)間,、峰面 積和峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均低于5%,,其結(jié)果 見表1。

 

在選定色譜條件下配制適宜濃度范圍的離子標(biāo)準(zhǔn)曲 線,,硫酸根在0.1~40 mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,, 其線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995。在本實(shí)驗(yàn)條件下,,基線噪音 約為1.0 nS,,根據(jù)三倍基線噪音計(jì)算出方法對(duì)硫酸根的定 量限為31.7 µg/L,折合樣品中硫酸根含量0.00015%,。

 

實(shí)際樣品分析及加標(biāo)回收
取達(dá)替肝素鈉樣品測(cè)定并進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn),,硫酸根的 加標(biāo)回收率依次在99~102%之間。樣品檢測(cè)結(jié)果見表2,。

 

結(jié)論
采用本方法可以方便,、快捷、準(zhǔn)確檢測(cè)達(dá)替肝素鈉 中的硫酸鹽,,操作較為簡單,,方法重現(xiàn)性較好,結(jié)果可 靠,。本實(shí)驗(yàn)所使用的色譜柱AS11同時(shí)可用于肝素鈉其它 檢測(cè)項(xiàng)目如多硫酸軟骨素等項(xiàng)目的檢測(cè)

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