【產(chǎn)品名稱】禽liu感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核酸PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙重實(shí)時(shí)熒光PCR法

【預(yù)期用途】

適用于禽liu感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)檢測(cè),，可用于臨床禽liu感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)感染的輔助診斷,，但不作確診使用。

禽liu感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核酸PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),，設(shè)計(jì)一對(duì)禽liu感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)特異性引物,，結(jié)合一條特異性探針，利用相應(yīng)儀器對(duì)PCR 過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷,。

【主要組成成份】

反應(yīng)液,、酶液、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品,。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存,、運(yùn)輸,、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月,。

【適用儀器】
ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長(zhǎng)期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融,。

【使用方法】 

1 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理 

血液,、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作,。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)） 

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照,；反應(yīng)管 數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份），每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR 反應(yīng)管中,，21μL/管,。

3.加樣（樣本處理區(qū)） 

將步驟1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋,，混勻,，短 暫離心。

4.PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL,； 熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定 

設(shè)置Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),，根據(jù)分析后圖像 調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)），以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照）,，重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測(cè)通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線,； 可疑：檢測(cè)通道 35值≤38,，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35值≤38,，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,， 判定為陽性，否則為陰性； 陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

 陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,； 陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7.檢測(cè)方法的局限性 

1. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集,、處理,、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

3. 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運(yùn)輸,，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果,； 7.本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

【注意事項(xiàng)】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完quan混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染,；

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【相關(guān)產(chǎn)品】

ZK-D-0173豬水皰性口炎(VSV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0174戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0175口蹄疫病毒A型(FMDV-A)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0176口蹄疫病毒亞洲1型(FMDV-Asia1)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0177腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0178豬流感(SIV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)