【產(chǎn)品名稱】豬鏈球菌(通用型、2型）PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙色實時熒光PCR法

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理,，定性檢測豬鏈球菌(通用型,、2型），對豬鏈球菌(通用型,、2型）引起的***的診斷和監(jiān)控具有重要指導意義,。

豬鏈球菌(通用型、2型）PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒針對豬鏈球菌(通用型,、2型）高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,，在反應體系中含豬鏈球菌(通用型、2型）基因組模板的情況下,，PCR反應得以進行并釋放熒光信號,。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結果的定性分析,。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

避光-20℃以下保存,，避免反復凍融，有效期為12個月,。

【檢驗方法】

1.試劑準備（試劑準備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體,。

（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n）,，并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)

（3）在無菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

（4）蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區(qū),。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存,。

2.樣本準備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN、Roche公司DNA提qu試劑盒提quDNA,，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。

3.加樣

   在上述制備好的PCR反應管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉移到PCR儀器上。

    根據(jù)需要,，在上述準備好的PCR反應管中分別加入陰性對照品以及陽性對照品各5 μl,，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉移到PCR儀器上,。

4.PCR（PCR擴增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,，并記錄放置順序,。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,，設置淬滅基團選擇None,。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長期。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期,。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時應對標本進行重復檢測,，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期,，則判定為陽性,，否則為陰性。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值,。

【檢驗方法的局限性】

當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的最di檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結果,。

本試劑盒僅供標本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽性結果應進一步使用培養(yǎng)法進行確診,。

【注意事項】

使用本試劑盒的實驗室,，應嚴格按照國家有關部分頒布的有關基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理；

為避免RNA降解,，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理,；

各區(qū)域物品均為專用,，不得交叉使用，以免污染,；檢測結束后,，應立即對工作臺清潔；

吸取反應液時,，應盡量避免產(chǎn)生氣泡,；上PCR 儀前，應注意檢查各反應管是否蓋緊,，以免液體蒸發(fā)造成結果不準確,；

試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心,；

試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),，并單獨存放；

為防止熒光干擾,，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記；

檢測過程中使用過的吸頭,，應直接打到盛有10%次氯酸的廢物缸內(nèi),，檢測結束的PCR 反應管，切忌開蓋,，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄,；工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒,；

9.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置,；不同批號試劑不能混用,；并在有效期內(nèi)使用。