詳細(xì)介紹
一.地塞米松快速檢測(cè)試劑盒原理及用途
地塞米松快速檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)尿樣,、組織,、飼料等樣本中的地塞米松,,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物,、抗體,、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,,樣本中的地塞米松和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗地塞米松抗體,加入酶標(biāo)記物后,,用TMB底物顯色,,樣本吸光度值與其所含地塞米松含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中地塞米松的殘留量,。
二.技術(shù)指標(biāo)及組成
試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)
反應(yīng)模式:25℃,,30min~15min
酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品,、高標(biāo)準(zhǔn)品,、酶標(biāo)記物、抗體工作液,、底物液A,、底物液B、終止液,、濃縮洗滌液,、復(fù)溶液
三.【*優(yōu)勢(shì)】
1、產(chǎn)品種類齊全,、質(zhì)量可靠,、*、靈敏度高,、效果穩(wěn)定,、易保存、操作簡(jiǎn)便
2,、免費(fèi)提供產(chǎn)品報(bào)價(jià),、實(shí)驗(yàn)原理、產(chǎn)品用途及中英文說(shuō)明書
3,、發(fā)貨及時(shí)(上海本地客戶有專門人員送貨上門及取標(biāo)本)
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四.需要的器材
儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī),、均質(zhì)器 ,、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器,、離心機(jī),、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,,100µl-1000µl,、多道300µl
五.樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
配液:
配液1:0.1M HCl 溶液 取0.86ml濃HCl加去離子水至100ml,。
配液2:0.1M NaOH 溶液 稱取0.4g NaOH加去離子水至100ml。
配液3:乙腈-0.1M HCl 溶液 V乙腈:V0.1M HCl =84:16,。
配液4:復(fù)溶液
將10×復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋,,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,。
六.操作流程
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻,。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃,。
實(shí)驗(yàn)開始前,,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,,輕輕振蕩5秒混勻,,25℃反應(yīng)30分鐘。
洗 滌:小心揭開蓋板膜,,將孔內(nèi)液體甩干,,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破),。
顯 色:每孔加入底物液A 50µl,,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,,25℃避光顯色15分鐘。
終 止:每孔加入終止液50µl,,輕輕振蕩混勻,,終止反應(yīng)。
測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm),。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成,。
七. 結(jié)果分析
百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,,即
百分吸光度值(%)= | A | ×100% |
A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度,。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析,。(索?。?/span>
八.注意事項(xiàng)
室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。
混合要均勻,,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,,很大程度上取決于洗板的*性,。
在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,,避免光線照射,。
不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑,。
顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),,應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì),。
反應(yīng)終止液有腐蝕性,,避免接觸皮膚。
九.特別說(shuō)明
由于不同指標(biāo)檢測(cè)的樣本是不同的,,處理方式也是不盡相同,,如需了解更多,更詳細(xì)的技術(shù)參數(shù)可我司客服專員,,歡迎廣大社會(huì)各界朋友前來(lái)咨詢和了解,。