發(fā)光分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源,，光線透過測試的樣品后,，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值,，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度,。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時,，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比,，其關(guān)系如下式：A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中：A 為吸光度；
I0：為入射的單色光強度,；
I：為透射的單色光強度,；
T：為物質(zhì)的透射率；
k：為摩爾吸收系數(shù),；
L：為被分析物質(zhì)的光程,，即比色皿的邊長；
c：為物質(zhì)的濃度,；
操作方法：
1,、接通電源，打開儀器開關(guān),，掀開樣品室暗箱蓋,，預(yù)熱10分鐘。
2,、將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔,。
3,、根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。
4,、將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi),，使空白管對準(zhǔn)光路,。
5、在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器,，使讀數(shù)盤指針指向t=0處,。
6、蓋上暗箱蓋,，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,，分別讀出測定管的光密度值,，并記錄。
7,、比色完畢,，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈,，樣品室用軟布或軟紙擦凈,。
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