新生隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

通用原則：

1,， 新生隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2,， 擴增子的長度應(yīng)不超過400bp,，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴增片斷約短,，有效的擴增反應(yīng)就越容易獲得,。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間,，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),，從而會導(dǎo)致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號,。
4,， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5,， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b）,，探針設(shè)計指導(dǎo)
1，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2,，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間,，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區(qū),。
3,，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用,，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,，選擇C多于G的鏈作探針,，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6,， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個bp,。
7,， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。

產(chǎn)品名稱	新生隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱	Cryptococcus neoformans
編號	BJP2291

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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標(biāo)準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈,，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點：
    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性,；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比,，對PCR反應(yīng)抑制更小,，而且熒光信號更強,，檢測靈敏度更高,；產(chǎn)品僅用于科研
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系，進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染,；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer,，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng),，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強,，可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。
服務(wù)流程:
1.客戶認真寫好訂單,，提供待檢基因相關(guān)信息,；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%),；
3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）,；
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄,；
5.PCR預(yù)實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率,；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測,；
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報告,。產(chǎn)品僅用于科研
以下是公司*產(chǎn)品：
羧基纖維素鈉3-溴-5-氟苯酚

羧基纖維素鈉2-氨基-3-氯三氟苯

羧基纖維素CM-232-氨基-3-氯三氟苯

羧基纖維素CM-321,2-雙(三氟基)苯

羧基纖維素CM-521,2-雙(三氟基)苯

DEAE纖維素鄰三氟酸

DEAE纖維素DE-23鄰三氟酸

DEAE纖維素DE-32鄰三氟酸

DEAE纖維素DE-32鄰三氟酸

DEAE纖維素DE-52Ethisterone
卵黃甘露醇高鹽瓊脂基礎(chǔ)二酚橙四鈉

改良Giolitti-Cantoni 肉湯鈣黃綠素

Vogel–Johnson 瓊脂基礎(chǔ)鈣黃綠素二鈉鹽

哥倫比亞CNA瓊脂鉻黑T

堿性蛋白胨水（APW）鉻藍黑R

堿性蛋白胨水（APW）間基紅

堿性蛋白胨水（APW）鄰菲啰啉

3%氯化鈉堿性蛋白胨水（APW）鄰菲啰啉鹽酸鹽

TCBS瓊脂鄰硝基苯酚

TCBS瓊脂對硝基苯酚