詳細(xì)介紹
服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,,支付預(yù)付款(30-50%),;
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提,、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn),,主要檢測(cè)引物的特異性和擴(kuò)增效率,;
6.正式定量實(shí)驗(yàn):對(duì)所有樣品上機(jī)檢測(cè);
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,,形成報(bào)告,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | 極小棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Corynebacterium minutissimum |
編號(hào) | BJP2280 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),,從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收,;PCR擴(kuò)增時(shí),,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點(diǎn):
極小棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增,,從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,,與傳統(tǒng)熒光染料相比,,對(duì)PCR反應(yīng)抑制更小,,而且熒光信號(hào)更強(qiáng),,檢測(cè)靈敏度更高;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,,進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染,;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針,、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分,,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),,方便用戶使用,;
試劑盒的通用性強(qiáng),可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和,。
以下是公司*產(chǎn)品:
維生素A醋酸酯氨基酸叔酯
維生素A醋酸酯氨基酸叔酯
葉酸2,2′,4′-三氯苯酮
葉酸2,2′,4′-三氯苯酮
葉酸基三酰氧基硅烷
維生素D2基三酰氧基硅烷
維生素D2Z-Ile-Ile
維生素D3Semagacestat (LY450139)
維生素D3環(huán)戊腈
維生素K1環(huán)戊腈
改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)溴酚藍(lán)
改良麥康凱肉湯基礎(chǔ)(CT-MAC)溴酚藍(lán)鈉
改良MC培養(yǎng)基苯胺藍(lán)(水溶)
TTC營養(yǎng)瓊脂苯胺藍(lán)O
LB肉湯苯胺藍(lán)
LB瓊脂溴百里香酚藍(lán)
玉米粉瓊脂培養(yǎng)基溴百里酚藍(lán)鈉鹽
高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基考馬斯亮藍(lán)G250
L型細(xì)菌高滲糖增菌培養(yǎng)基考馬斯亮藍(lán)R250
L型細(xì)菌高滲鹽增菌培養(yǎng)基噻唑藍(lán)
通用原則:
1, 先選擇好探針,,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針,。
2, 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),,擴(kuò)增片斷約短,,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3,, 保持GC含量在20%和80%之間,,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,,及在SG分析中非特異信號(hào),。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測(cè),,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測(cè)探針,,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū),。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,,5’G會(huì)有淬滅作用,,即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,,這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。
6,, 探針應(yīng)盡可能的短,,不要超過30個(gè)bp。
7,, 檢測(cè)探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu),。