詳細(xì)介紹
通用原則:
1,, 貓皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針,。
2,, 擴增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),,擴增片斷約短,,有效的擴增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3,, 保持GC含量在20%和80%之間,,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會導(dǎo)致擴增效率的降低,,及在SG分析中非特異信號,。
4,, 為了保證效率和重復(fù)性,,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b),探針設(shè)計指導(dǎo)
1,,在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2,,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū),。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,,5’G會有淬滅作用,,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,,G的含量多于C會降低反應(yīng)效率,,這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6,, 探針應(yīng)盡可能的短,,不要超過30個bp。
7,, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu),。
產(chǎn)品名稱 | 貓皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Feline Herpesvirus type 1(FHV-1) |
編號 | BJP2410 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,,從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,,與傳統(tǒng)熒光染料相比,,對PCR反應(yīng)抑制更小,而且熒光信號更強,,檢測靈敏度更高,;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進(jìn)而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染,;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針、模板外的所有實驗所需組分,,并配備2×Buffer,,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng),方便用戶使用,;
試劑盒的通用性強,,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和,。
服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,,支付預(yù)付款(30-50%),;
3.設(shè)計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提,、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實驗,,主要檢測引物的特異性和擴增效率,;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,,形成報告,。產(chǎn)品僅用于科研
以下是公司*產(chǎn)品:
β-胸苷L-苯氨酰胺
β-胸苷L-苯氨酰胺
2′-脫氧胸苷-5′-單磷酸二鈉鹽4,7-二氧基-1-茚酮
2′-脫氧胸苷-5′-單磷酸二鈉鹽2,5-二溴-3,4-二硝基噻吩
2′-脫氧胸苷-5′-單磷酸二鈉鹽2,5-二溴-3,4-二硝基噻吩
2′-脫氧胸苷-5′-二磷酸三鈉鹽N-羥基鄰苯二酰亞胺(NOP)
2′-脫氧胸苷-5′-二磷酸三鈉鹽N-羥基鄰苯二酰亞胺(NOP)
2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽N-羥基鄰苯二酰亞胺(NOP)
2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽Amberlite?IRA402 強堿型陰離子交換樹脂
2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽1,2-萘醌
麥芽浸膏湯 溴化鉀
錳鹽營養(yǎng)瓊脂 無水碳酸鉀
皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ) 氯酸鉀
卵黃瓊脂基礎(chǔ) 鉻酸鉀
皰肉牛肉粒 重鉻酸鉀
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)氟化鉀
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)添加劑氫氧化鉀
PALCAM 瓊脂鉀
PALCAM添加劑過硫酸鉀
LPM瓊脂焦硫酸鉀