詳細介紹
通用原則:
1,, 博茲曼熒光桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,,然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2,, 擴增子的長度應不超過400bp,,理想的能在100-150bp內(nèi),擴增片斷約短,,有效的擴增反應就越容易獲得,。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應,,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號,。
4,, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5,, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b),,探針設(shè)計指導
1,在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2,,探針的Tm值應在68-70℃之間,,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū),。
3,,探針的5’端要避免有鳥氨酸,,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,,選擇C多于G的鏈作探針,,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6, 探針應盡可能的短,,不要超過30個bp,。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu),。
產(chǎn)品名稱 | 博茲曼熒光桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Fluoribacter bozemanae |
編號 | BJP2417 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實時熒光定量PCR技術(shù),,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,,從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,,提高熒光定量PCR反應的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,,與傳統(tǒng)熒光染料相比,,對PCR反應抑制更小,而且熒光信號更強,,檢測靈敏度更高,;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,,進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,,方便用戶使用;
試劑盒的通用性強,,可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,,提供待檢基因相關(guān)信息,;
2.簽訂技術(shù)服務合同,支付預付款(30-50%),;
3.設(shè)計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成),;
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄,;
5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率,;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測,;
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報告,。產(chǎn)品僅用于科研
以下是公司*產(chǎn)品:
4-氯苯氧酸鈉2-硝基咪唑
2,4-二氯苯氧酸2-硝基咪唑
2,4-二氯苯氧酸2-硝基咪唑
2,4-二氯苯氧酸雙(2,2,6,6-四基-4-哌啶基)癸二酸酯
2,4-二氯苯氧酸鈉雙(2,2,6,6-四基-4-哌啶基)癸二酸酯
2,4-二氯苯氧酸鈉雙(2,2,6,6-四基-4-哌啶基)癸二酸酯
2,4-二氯苯氧酸鈉偏苯三酸
氯吡苯脲偏苯三酸
氯吡苯脲偏苯三酸
氯吡苯脲萘酚AS-D-酸酯
血液瓊脂基礎(chǔ) 二醇醚
血液增菌培養(yǎng)基 基叔基醚
氯化三苯四氮唑-沙保羅培養(yǎng)基 苯基磺酰氟
麥康凱瓊脂 鈣(危險品)
麥康凱瓊脂(不含鹽) 氧化鈣
麥康凱瓊脂2號 氟化鈣
麥康凱瓊脂3號 氫氧化鈣
堿性瓊脂平板 次亞磷酸鈣
堿性膽鹽瓊脂 過磷酸鈣
胰膘肉湯基礎(chǔ) 磷酸二氫鈣