馬鼻炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時(shí)間,；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。

服務(wù)流程:

1.客戶認(rèn)真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息,；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,，支付預(yù)付款（30-50%),；
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物（或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成）,；
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄,；
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn)，主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率,；
6.正式定量實(shí)驗(yàn)：對(duì)所有樣品上機(jī)檢測,；
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報(bào)告,。產(chǎn)品僅用于科研

產(chǎn)品名稱	馬鼻炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱	Equine Rhinitis Virus
編號(hào)	BJP2391

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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號(hào),，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
   馬鼻炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增，從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性,；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比,，對(duì)PCR反應(yīng)抑制更小,，而且熒光信號(hào)更強(qiáng)，檢測靈敏度更高,；產(chǎn)品僅用于科研
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,，進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分，并配備2×Buffer,，可完成不同類型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強(qiáng),，可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和。
以下是公司*產(chǎn)品：
α-萘酸鉀3,6-二氯噠嗪-4-酸

α-萘酸鉀八甘醇

β-萘酸八甘醇

β-萘酸5-氟-2-氧基吡啶

多效唑5-氟-2-氧基吡啶

多效唑5-氟-2-氧基吡啶

三十烷醇2-羥基-5-氟吡啶

三十烷醇叔氧羰基-D-天冬氨酸 4-芐酯

三十烷醇叔氧羰基-D-天冬氨酸 4-芐酯

馬來酰肼(S)-(+)-1-(2-吡咯烷基)吡咯烷
改良Giolitti-Cantobi 肉湯酸正辛酯

TMP瓊脂培養(yǎng)基聚（1,，4-二醇二酸）酯

緩沖蛋白胨水（BPW）  聚烯酸酯

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)碳酸二醇酯

膽硫乳瓊脂（DHL） 肉豆蔻酸異酯

三糖鐵瓊脂（TSI） 酸正酯

SS 瓊脂    硼酸三正酯

亞利桑那菌瓊脂（SA）  亞磷酸三酯

氯化鎂孔雀綠肉湯（MM,，RV Medium）  磷酸三酯

HE 瓊脂（HE）  磷酸三酯
通用原則：
1， 先選擇好探針,，然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針,。
2,， 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp，理想的能在100－150bp內(nèi),，擴(kuò)增片斷約短,，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3,， 保持GC含量在20％和80％之間,，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,，及在SG分析中非特異信號(hào),。
4， 為了保證效率和重復(fù)性,，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,，尤其是G（不能有4個(gè)連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測,，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b），探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,，在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測探針,，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū),。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸,，5’G會(huì)有淬滅作用,，即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在
4，選擇C多于G的鏈作探針,，G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,，這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。
6,， 探針應(yīng)盡可能的短,，不要超過30個(gè)bp,。
7,， 檢測探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。