詳細介紹
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,,提供待檢基因相關信息,;
2.簽訂技術服務合同,支付預付款(30-50%),;
3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成),;
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉錄,;
5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率,;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測,;
7.實驗結果和數(shù)據(jù)分析,形成報告,。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱 | 流感嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Haemophilus influenzae |
編號 | BJP2471 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實時熒光定量PCR技術,,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。
產(chǎn)品特點:
流感嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,,從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,,提高熒光定量PCR反應的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,,與傳統(tǒng)熒光染料相比,對PCR反應抑制更小,,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高,;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染,;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針、模板外的所有實驗所需組分,,并配備2×Buffer,,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,,方便用戶使用,;
試劑盒的通用性強,可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實時熒光定量PCR儀和,。
以下是公司*產(chǎn)品:
鄰苯二酚紫2-溴-6-硝基苯
比布里希猩紅3-溴-2-胺
比布里希猩紅3-溴-2-胺
比布里希猩紅3-溴-2-胺
比布里希猩紅5-(2-羥基)氨基鄰苯酚
間酚紫2,6-二氯-3-(三氟基)吡啶
間酚紫2,6-二氯-3-(三氟基)吡啶
間酚紫原卟啉
二苯胺磺酸鈉原卟啉
二苯胺磺酸鈉5-氨基-2-吡啶腈
鹽酸吐根酚堿血粉蛋白胨
三尖杉寧堿全胃蛋白胨
三尖杉堿明膠蛋白胨
千金藤素多價蛋白胨
查斯曼寧堿特殊蛋白胨
查斯馬寧胃蛋白胨
訶子鞣質 (97%)普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基
白屈菜紅堿普通肉湯培養(yǎng)基
鹽酸白屈菜紅堿營養(yǎng)瓊脂
鵝去氧膽酸營養(yǎng)肉湯
通用原則:
1, 先選擇好探針,,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2,, 擴增子的長度應不超過400bp,,理想的能在100-150bp內(nèi),,擴增片斷約短,,有效的擴增反應就越容易獲得,。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應,,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號,。
4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,,以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成,。
b),,探針設計指導
1,在設計引物之前設計探針
2,,探針的Tm值應在68-70℃之間,,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū),。
3,,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6,, 探針應盡可能的短,,不要超過30個bp。
7,, 檢測探針的DNA折疊和二級結構,。