詳細(xì)介紹
唾液乳酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒熒光化學(xué)物質(zhì):
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán),。探針完整時(shí),,報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步,。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺,。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異,。產(chǎn)品僅用于科研
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對,導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,,不會(huì)產(chǎn)生熒光,。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
定量PCR除可以對樣品的初始濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量外,,還有其它多種豐富的應(yīng)用,。還包括基因表達(dá)調(diào)控情況的分析,、等位基因的分析等。
產(chǎn)品名稱 | 唾液乳酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Lactobacillus salivarius |
編號 | BJP2566 |
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖?
熒光定量PCR服務(wù):
簡介:實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng),、有效解決PCR污染問題,、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化,;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異,;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等,。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),,全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器,。
1,、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品),;或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品),。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2,、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成,。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,。
(04)實(shí)驗(yàn)完成后,,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3,、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn),。
以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品:
甘氨酸鈣5-氨基喹啉
甘氨酸鈣4-氯喹啉
3-氨基酸4-氯喹啉
3-氨基酸苯酰酸
3-氨基酸苯酰酸
3-氨基異酸2,2-二氧基酰胺
3-氨基異酸奎寧鹽酸鹽二水合物
2-氨基異酸奎寧鹽酸鹽二水合物
2-氨基異酸奎寧鹽酸鹽二水合物
2-氨基異酸基(2-基-3-呋喃基)二硫
唾液乳酸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒查爾酮異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L檢測試劑盒
查斯馬寧異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L檢測試劑盒
茶多酚異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K檢測試劑盒
茶黃素異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I檢測試劑盒
茶黃素-3,3'-雙沒食子酸異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H檢測試劑盒
茶黃素-3'-沒食子酸酯異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G檢測試劑盒
茶黃素-3-沒食子酸酯異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E檢測試劑盒
茶堿異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D檢測試劑盒
茶皂素異質(zhì)性胞核核糖核蛋白C檢測試劑盒
柴胡皂苷A異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3檢測試劑盒
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,,并記錄在電腦軟件之中,,通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此,,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),,此時(shí)微小誤差尚未放大,,因此Ct值的重現(xiàn)性*,,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的,。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,,重現(xiàn)性的定量方法,已得到全世界的*,,廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。產(chǎn)品僅用于科研