詳細介紹
通用原則:
1,,先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針,。
2,, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的能在100-150bp內,,擴增片斷約短,,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3,, 保持GC含量在20%和80%之間,,GC富含區(qū)容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,,及在SG分析中非特異信號,。
4, 為了保證效率和重復性,,應避免重復的核苷酸序列,,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,,以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成,。
b),探針設計指導
1,,在設計引物之前設計探針
2,,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,,則要仔細審查GC富含區(qū),。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,,5’G會有淬滅作用,,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,,G的含量多于C會降低反應效率,,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6,, 探針應盡可能的短,,不要超過30個bp。
7,, 檢測探針的DNA折疊和二級結構,。
產品名稱 | 卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Pneumocystis carinii |
編號 | BJP2779 |
產品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生,,提高熒光定量PCR反應的特異性,;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統熒光染料相比,,對PCR反應抑制更小,,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高,;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系,,進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,方便用戶使用,;
試劑盒的通用性強,,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和,。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,,提供待檢基因相關信息;
2.簽訂技術服務合同,,支付預付款(30-50%),;
3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提,、定量,、RNA反轉錄;
5.PCR預實驗,,主要檢測引物的特異性和擴增效率,;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結果和數據分析,,形成報告,。
原理:
卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,,加入過量SYBR熒光染料,,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,;PCR擴增時,,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,,從而熒光監(jiān)測系統可接收到熒光信號,,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步,。
以下是公司*產品:
酮酸鈉小鼠前脂肪細胞
酮酸鈉小鼠成纖維細胞
2,2’-聯喹啉-4,4’-二羧酸鈉小鼠導管上皮細胞
2,2’-聯喹啉-4,4’-二羧酸鈉小鼠上皮細胞
2,2’-聯喹啉-4,4’-二羧酸鈉小鼠軟骨細胞
L(-)酒石酸鈉小鼠舌表皮細胞
L(-)酒石酸鈉小鼠腎集合管上皮細胞
偏釩酸鈉小鼠腎上腺皮質細胞
偏釩酸鈉小鼠腎上腺髓質細胞
無水偏釩酸鈉小鼠腎系膜細胞(1R)-(-)-桃金娘烯醛CDCP1檢測試劑盒
多索茶堿CD8分子檢測試劑盒
5-腺苷一磷酸二鈉鹽CD82分子檢測試劑盒
5-腺苷二磷酸二鈉鹽CD73分子檢測試劑盒
5-腺苷三磷酸二鈉鹽CD6分子檢測試劑盒
大豆異黃酮CD68分子檢測試劑盒
梔子CD63分子檢測試劑盒
硬脂酸CD5分子樣蛋白檢測試劑盒
去斑蝥素CD5分子檢測試劑盒
KFYCD4分子檢測試劑盒