原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步,。

通用原則：
1，豬霍亂沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,，然后設計引物使其盡可能的靠近于探針,。
2， 擴增子的長度應不超過400bp,，理想的能在100－150bp內,，擴增片斷約短，有效的擴增反應就越容易獲得,。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3,， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產生非特異反應,，從而會導致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號,。
4,， 為了保證效率和重復性，應避免重復的核苷酸序列,，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5,， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成,。
b）,，探針設計指導
1，在設計引物之前設計探針
2,，探針的Tm值應在68－70℃之間,，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區(qū),。
3,，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用,，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應效率,，這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6， 探針應盡可能的短,，不要超過30個bp,。
7,， 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,，提供待檢基因相關信息,；
2.簽訂技術服務合同，支付預付款（30-50%),；
3.設計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）,；
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉錄,；
5.PCR預實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率,；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測,；
7.實驗結果和數(shù)據(jù)分析，形成報告,。

以下是公司*產品：

酰氨基二酸二酯人臍動脈內皮細胞

環(huán)磷酰胺人臍靜脈平滑肌細胞

環(huán)磷酰胺人臍動脈平滑肌細胞

環(huán)磷酰胺人臍帶血單個核細胞

環(huán)磷酰胺小鼠骨髓間充質干細胞（EGFP標記）

間羥基苯酸人骨髓間充質干細胞（hMSCs）

間羥基苯酸人間充質干細胞-脂肪

間羥基苯酸人間充質干細胞-肝

七氧化四鋱人間充質干細胞-臍帶

七氧化四鋱小鼠神經(jīng)干細胞Ent-3-氧代貝殼烯烷-16,17-二醇Super Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）琥珀酰亞胺酯

L-焦谷氨酸酯Super Fluor 647（效果同Alexa Fluor 647）琥珀酰亞胺酯

Momor-腦苷脂ISuper Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯

N1,N10-雙(對香豆酰)亞精胺Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）琥珀酰亞胺酯

N-對反式香豆酰酪胺DABCYL酸

N-反式-阿魏酰低聚糖-3-氧基酪胺DABCYL酸

N-反式阿魏酰酪胺DABCYL酸

N-基瓜馥木堿DABCYL 酸琥珀酰亞胺酯

O-beta-D-吡喃葡萄糖苷對烯基苯酯DABCYL 酸琥珀酰亞胺酯

R(+)-戈米辛 M1DABCYL C2胺

產品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,，可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生,，提高熒光定量PCR反應的特異性,；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比,，對PCR反應抑制更小,，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高,；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系,，進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer,，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強,，可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。