熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,，該探針為一寡核苷酸,，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收,；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步,。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP）,，有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺,。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線,，確定PCR反應(yīng)是否特異,。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對,，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,，退火過程中,，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 ,。

熒光定量PCR服務(wù)：

中間葡萄球菌探針法熒光定量PCR試劑盒簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比,，它具有特異性更強,、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化,；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片,，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),，全部實驗皆使用進口試劑完成,，主要定量PCR儀器。
1,、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料,；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列,。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2,、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA,，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析,。
（04）實驗完成后,，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3,、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準,。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品：

二聚對二苯人ALK酪氨酸激酶受體ELISA試劑盒

二聚對二苯人小扁豆素結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA試劑盒

二苯并-18-冠醚-6人輔肌動蛋白α3(ACTN3)ELISA試劑盒

二苯并-18-冠醚-6人腎素受體(Renin receptor)ELISA試劑盒

苯并-18-冠醚-6人腺苷脫氨酶域包含蛋白1(ADAD1)ELISA試劑盒

苯并-18-冠醚-6人伯胺氧化酶膜(Membrane primary amine oxidase)ELISA試劑盒

2-溴-1-基吡啶四氟硼酸鹽人組織非特異性堿性磷酸酶(AP-TNAP)ELISA試劑盒

2-溴-1-基吡啶四氟硼酸鹽人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)ELISA試劑盒

焦磷酸人糖蛋白α1B(A1BG)ELISA試劑盒

焦磷酸人調(diào)亡誘導(dǎo)因子 1(AIFM1)ELISA試劑盒脫氫山楂酸Fluo-4, pentasodium salt  

5,6,3',4'-四羥基-7-氧基黃酮Fluo-4, pentapotassium salt  

仙茅木酚素Fluo-4, pentaammonium salt

香草酸酯糖苷BCECF acid  [2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein] *mixed isomers*

馬尾柴酸BCECF, AM  [2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein, acetoxymethyl ester]  

喇叭茶醇BCECF, AM [2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein, acetoxymethyl ester] *5mM solution in anhydrous DMSO*

愈創(chuàng)木素FDA [Fluorescein diacetate]  

黃獨素DCFDA [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate] *Mixed isomers*  

重樓皂苷VIICFDA, SE [5-(and 6)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester] *Mixed isomers*

竹葉椒堿CDCFDA [5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate] *Mixed isomers* 

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,，并記錄在電腦軟件之中,，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果,。因此,，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大,，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,，得到的Ct值是恒定的,。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,，因此,，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的,、值得信賴的科學(xué)方法,。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性的定量方法,，已得到全世界的*,，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核,、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。定量PCR除可以對樣品的初始濃度進行準確定量外,，還有其它多種豐富的應(yīng)用,。還包括基因表達調(diào)控情況的分析,、等位基因的分析等。