榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間,；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理,；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增，從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性,；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比,，對PCR反應(yīng)抑制更小,，而且熒光信號更強(qiáng)，檢測靈敏度更高,；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,，進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分，并配備2×Buffer,，可完成不同類型熒光探針的實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng),，方便用戶使用,；
    試劑盒的通用性強(qiáng)，可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實(shí)時熒光定量PCR儀和,。

產(chǎn)品名稱	榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱	詳見說明書
編號	BJP3141

通用原則：
1，先選擇好探針,，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針,。
2， 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,，理想的能在100－150bp內(nèi),，擴(kuò)增片斷約短，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得,。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3,， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),，從而會導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,，及在SG分析中非特異信號。
4,， 為了保證效率和重復(fù)性,，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5,， 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b）,，探針設(shè)計指導(dǎo)
1,，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間,，如果是目測探針,，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,，探針的5’端要避免有鳥氨酸,，5’G會有淬滅作用,，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率,，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6， 探針應(yīng)盡可能的短,，不要超過30個bp,。
7,， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
榛子源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,，提供待檢基因相關(guān)信息,；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%),；
3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成）,；
4.DNA/RNA的抽提、定量,、RNA反轉(zhuǎn)錄,；
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn)，主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率,；
6.正式定量實(shí)驗(yàn)：對所有樣品上機(jī)檢測,；
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報告,。
以下是公司*產(chǎn)品：

巴柳氮鈉標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍  Amresco

巴柳氮鈉相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍  Amresco

巴柳氮鈉相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍  Amresco

酸倍氯米松標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍

山崳酰氧基聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍

雙-基氧苯酚氧苯基三嗪標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍

 

雙-基氧苯酚氧苯基三嗪相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品

 

Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍

鹽酸貝那普利標(biāo)準(zhǔn)品Guanidine thiocyanate 異硫氰酸胍

貝那普利相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品Hydrindantin dihydrate 二水還原茚三酮

貝那普利相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品Fluorescein diacetate 二酸熒光素生長終止特異性同源盒基因抗體5-Hydroxy-2-Methyl-1,4-Naphthoquinone,；白花丹醌/蘭雪醌

谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗體Cepharanthine；千金藤素

粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體Tangeretin,；桔皮素

肌細(xì)胞生長抑制素抗體Aloeemodin,；蘆薈大黃素

膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體Chrysophanol；大黃酚

凝溶膠蛋白抗體Hyperoside,；金絲桃苷

膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體Kaempferitrin,；苷

綠色熒光蛋白Imperatorin；歐前胡素

GDNF家族受體α-4抗體Isoimperatorin,；異歐前胡素

GDNF家族受體α-1抗體Indigo,；靛藍(lán)

原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。