假結(jié)核耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項：1．基礎(chǔ)程序,；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù),；5．PCR 反應(yīng)液的配制,；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；8．PCR擴增產(chǎn)物,；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 通用原則：
1,，假結(jié)核耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2,， 擴增子的長度應(yīng)不超過400bp,，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴增片斷約短,，有效的擴增反應(yīng)就越容易獲得,。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間,，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),，從而會導(dǎo)致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號,。
4,， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5,， 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b）,，探針設(shè)計指導(dǎo)
1,，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間,，如果是目測探針,，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,，探針的5’端要避免有鳥氨酸,，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,，選擇C多于G的鏈作探針,，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6,， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個bp,。
7,， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。

產(chǎn)品名稱	假結(jié)核耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱	Yersinia pseudotuberculosis
編號	BJP3065

產(chǎn)品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,，從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性,；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比,，對PCR反應(yīng)抑制更小,，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高,；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,，進(jìn)而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物,、探針,、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer,，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng),，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強,，可適用于Roche的Light Cycler,、ABI各型實時熒光定量PCR儀和,。

服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息,；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,，支付預(yù)付款（30-50%)；
3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成）,；
4.DNA/RNA的抽提,、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄,；
5.PCR預(yù)實驗,，主要檢測引物的特異性和擴增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測,；
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,，形成報告。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時,，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時,，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴增一條DNA鏈,，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。

以下是公司*產(chǎn)品：
 

NFkB誘導(dǎo)的激酶抗體Vitamin K3,；維生素K3

鈉轉(zhuǎn)運體蛋白抗體Saikosaponin B2；柴胡皂苷B2

P物質(zhì)受體抗體Dihydroresveratrol,；二氫藜蘆醇

神經(jīng)激肽A受體/K物質(zhì)受體抗體Platycodin D,；桔梗皂苷D

神經(jīng)激肽 B抗體Rebaudioside A；萊苞迪甙A

神經(jīng)激肽B受體抗體Schisandrol B；五味子醇

神經(jīng)激肽-B受體抗體Schisantherin A,；五味子酯

腫瘤抑制基因抗體Theophylline,；茶堿

孤菲肽/痛敏肽抗體Vitamin B6；維生素B6

孤菲肽受體/痛敏肽受體抗體Maltitol,；麥芽糖醇青藥敏實驗紙片（擴散法） P 10ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

多粘菌素B PB 300ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

鏈 S 10ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

磺胺惡唑/氧芐啶藥敏實驗紙片 SXT 25ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

四環(huán)素藥敏實驗紙片（擴散法） TE 30ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

妥布 TOB 10ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

萬古藥敏實驗紙片（擴散法） VA 30ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

頭孢拉定藥敏紙片1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

克林藥敏實驗紙片（擴散法） DA 2ug1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

氧芐嘧啶藥敏紙片1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶

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