PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件:
禽流感通用型H1-H15亞型PCR試劑盒規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系
10×擴(kuò)增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.1～2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul

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技術(shù)概論:
禽流感通用型H1-H15亞型PCR試劑盒規(guī)格聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感,、產(chǎn)率高、快速,、簡(jiǎn)便,、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn),；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷,；可從一根毛發(fā)、一滴血,、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測(cè)鑒定,。過去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑,。
產(chǎn)品特點(diǎn):
禽流感通用型H1-H15亞型PCR試劑盒規(guī)格PCR引物設(shè)計(jì)的目的是為了找到一對(duì)合適的核苷酸片段,，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。因此,，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否,。
要設(shè)計(jì)引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時(shí)應(yīng)預(yù)測(cè)將要擴(kuò)增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥?jí)結(jié)構(gòu),。如這個(gè)區(qū)域單鏈能形成二級(jí)結(jié)構(gòu),，就要避開它。如這一段不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu),，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計(jì)引物,。
現(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計(jì)一對(duì)引物。一般引物長(zhǎng)度為15-30堿基,，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為100-600堿基對(duì),。
讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%,。而且四種堿基的分布隨機(jī),。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設(shè)計(jì)的就不合理,。應(yīng)重新尋找區(qū)域設(shè)計(jì)引物,。
同時(shí)引物之間也不能有互補(bǔ)性，一般一對(duì)引物間不應(yīng)多于4個(gè)連續(xù)堿基的互補(bǔ),。
引物確定以后,，可以對(duì)引物進(jìn)行必要的修飾，例如可以在引物的5′端加酶切位點(diǎn)序列,；標(biāo)記生物素,、熒光素、等,，這對(duì)擴(kuò)增的特異性影響不大,。但3′端不能進(jìn)行任何修飾，因?yàn)橐锏难由焓菑?′端開始的,。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位,，因?yàn)槊艽a子第3位易發(fā)生簡(jiǎn)并，會(huì)影響擴(kuò)增的特異性與效率,。
阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒間序列(探針法）綜上所述我們可以歸納十條PCR引物的設(shè)計(jì)原則：
1,、禽流感通用型H1-H15亞型PCR試劑盒規(guī)格引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)并具有特異性。
2,、 產(chǎn)物不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu),。
3,、引物長(zhǎng)度一般在15~30堿基之間。
4,、G+C含量在40%~60%之間,。
5、堿基要隨機(jī)分布,。
6,、引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。
7,、引物之間不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ),。
8、引物5′端可以修飾,。
9,、引物3′端不可修飾。
10,、引物3′端要避開密碼子的第3位,。
PCR引物設(shè)計(jì)的目的是找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列,。如前述,，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。對(duì)引物的設(shè)計(jì)不可能有一種包羅萬象的規(guī)則確保PCR的成功,，但遵循某些原則,，則有助于引物的設(shè)計(jì)。
IL3RAOthersHuman人IL3RA/CD123人細(xì)胞裂解液(陽(yáng)性對(duì)照)

CM-H023人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

SPHK1OthersHuman人SPHK1/SphingosineKinase1桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液(陽(yáng)性對(duì)照)

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A人肺癌細(xì)胞,，NCI-H838[H838]細(xì)胞BGC-823(胃腺癌細(xì)胞(低分化))

人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204

主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Manytypesofcells包裝：5×105次方(1ml)

Phospho-NF-κB2p100(Ser866/870)細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子p100抗體規(guī)格：0.1ml

NFKBp65細(xì)胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體規(guī)格：0.1ml

Phospho-NFKBp65(Ser276)磷酸化細(xì)胞核因子NF-κBp65抗體規(guī)格：0.1ml

Phospho-NFKBp65(Ser468)磷酸化細(xì)胞核因子NF-κBp65抗體規(guī)格：0.1ml

phospho-NFKBp65(Ser536)磷酸化細(xì)胞核因子抗體規(guī)格：0.1ml
禽流感通用型H1-H15亞型PCR試劑盒規(guī)格2-Fluoro-1,3-dimethylimidazolidiniumhexafluorophosphate2-氟-1,3-二甲基氯化咪唑翁六氟磷酸酯(DFIH)   規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCL

OBESTATIN(RAT)肥胖抑制素(大鼠)   規(guī)格：1000µg/mL,基體：10%HCl

BenzethoniumChloride芐索氯銨   規(guī)格：1000mg/L,基體:水

β-AmyloidPeptide(1-42),ratβ-淀粉樣蛋白(1-42),大鼠   規(guī)格：1000mg/l,溶劑：1%硫酸

AngiotensinIhumanacetatesalthydrate血管緊張素I   規(guī)格：1000mg/L,溶劑：1%鹽酸

AngiotensinIII,human血管緊張素III   規(guī)格：1000mg/L,溶劑：5%鹽酸

Apamin蜂毒明肽;蜂針液明肽   規(guī)格：1000u/mg,Sigma分裝

Clomiphenecitrate枸櫞酸氯米芬,克羅米芬   規(guī)格：1000μg/ml

SR3335;ML176ML-176;SR-3335   規(guī)格：1000μg/ml

SU5416Semaxanib(SU-5416)   規(guī)格：1000μg/ml

Milbemycinoxime米爾貝肟   規(guī)格：1000μg/ml

Valdecoxib伐地考昔   規(guī)格：1000μg/ml

GastrinI,human胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素   規(guī)格：1000μg/ml

Uridine5'-diphosphoglucuronicacidtrisodiumsaltUDPGANa,；尿苷-5'-二磷酸葡糖醛酸三鈉鹽   規(guī)格：1000μg/ml

Ticarcillindisodiumsalt替卡西林,替卡西林二鈉   規(guī)格：1000μg/ml