多功能氧化酶（MFO）試劑盒公司正銷售的產(chǎn)品：雜交瘤細(xì)胞株；NZYT-ZJC品牌冰凍切片組織TNF BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
921-01-7D-半胱氨石蠟切片組織TNF BETA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
人抗流行性出血熱病毒抗體IgG(EHF)ELISA試劑盒細(xì)胞TNF BETA蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒
豬雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒樣本細(xì)胞TNF

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀,、離心機,、移液器、96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

1,、細(xì)菌,、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液）,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W,，超聲3s,，間隔10s，重復(fù)30次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

2、血清（漿）樣品：直接檢測,。

注意事項

1,、試劑三為酶，不可冷凍,，使用時在冰上放置,。

2、對照管只需要做一管,。

3,、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1,。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低,，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑,；（3）反應(yīng)時間不夠,，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù),。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞,，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4℃離心,，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品,。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4 ℃離心,，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測,。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍,。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存,；如果當(dāng)天不能完成測定,，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定,。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表,，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,，可當(dāng)天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降,，必須注意在使用前先輕輕離心一下,，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,，可當(dāng)天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml,，10U/ml ，5U/ml,，2.5U/ml,，1.25U/ml，0.625U/ml,。在隨后的檢測中可以各取20微升,，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降,， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用,；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考,。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔,。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始,，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘,。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘,。

c. 450nm 測定吸光度,。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片,。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定,。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定,。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品,；如果測定出來的抑制百分率偏低,，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時,，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit),。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算,。

測定步驟：

1,、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm,。

2,、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少,。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋,。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二,，充分混勻,。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少,，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4,、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5,、 樣本測定

大鼠促黃體激素(LH)試劑盒明膠水溶液(2%,無菌)[Val5]-Angiotensin II acetate salt hydrate ≥97% (HPLC)六二硅烷 98%

大鼠抗心肌抗體(AMA)試劑盒 明膠水溶液(5%,無菌)Activity-Dependent Neuroprotective Protein Fragment74-81 97%三硅烷 97%

大鼠抗心肌抗體(AMA)試劑盒 檸檬—檸檬鈉緩沖液(0.1mol/L,pH3.0-6.6)N-Acetyl-Ile-Glu-Pro-Asp-p-nitroanilide ≥97% (HPLC)三硅烷 90%

大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒檸檬—檸檬鈉緩沖液(0.1mol/L,pH4.5)絲拉克肽 ≥97% (HPLC)尿囊素 98%

大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒檸檬—檸檬鈉緩沖液(1mol/L,pH6.0)促上腺皮質(zhì)激素片段 1-10    97%2-氨-5-硝-6-吡啶  98%

大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)試劑盒檸檬—檸檬鈉緩沖液(1mol/L,pH6.0)促上腺皮質(zhì)激素片段 1-17    ≥97% (HPLC)2-氨-3-硝-6-吡啶  98%

大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)試劑盒平衡鹽溶液(10×BBS)促上腺皮質(zhì)激素片段 1-24    ≥97% (HPLC)2-溴-4-氨吡啶 97%

大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)試劑盒葡萄糖-磷鹽緩沖液(G-PBS)Adrenorphin ≥95% (HPLC)5-氨-2-吡啶 98%

大鼠復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)試劑盒葡萄糖溶液(1mol/L,無菌)上腺髓質(zhì)素(22-52 )(體)   ≥97% (HPLC)4-氨-2-吡啶 98%

大鼠胰蛋白(trypsin)試劑盒 葡萄糖溶液(10%,無菌)β-淀粉樣多肽 1-42  ≥95% (HPLC)3-氨-2-吡啶 97%

大鼠胰蛋白(trypsin)試劑盒 葡萄糖溶液(20%,無菌)Angiotensin III,human ≥98.0% (HPCE)3,5-雙(三氟)苯 97%

大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒 三化鐵水溶液(10%)[Ile7] Angiotensin III ≥95% (HPLC)2-溴-5-三氟苯 98%

大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒 TCA(10%w/v)替普羅肽 ≥95% (TLC)對二三氟苯 99%

大鼠血小板因子3(PF-3)試劑盒 TCA(10%w/v)Autocamtide 2 trifluoroacetate salt ≥97% (HPLC)5-溴-1-茚 98%

大鼠血小板因子3(PF-3)試劑盒 水合溶液(10%w/v)[Arg8]-Vasotocin acetate salt ≥97% (HPLC)N-芐哌啶 98%

大鼠可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒水合溶液(10%w/v)BOC-O-芐-L-酪氨 98% 98%
多功能氧化酶（MFO）試劑盒Western Blot ECL超敏發(fā)光液(A液12.5ml,、B液12.5ml)五指柑（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

KODAK膠片五指毛桃（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

顯影液試劑西北甘草異黃Human, Mouse

定影液試劑西貝母（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

萘酚染色試劑盒西貝母苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

TMB 2HCl 3,3’5,5’-四聯(lián)苯二鹽西伯利亞遠(yuǎn)志口山B(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse

硝纖維素膜(NC膜；膜孔徑0.45um)西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5Human, Mouse, Rat

PVDF膜/二氟化樹脂膜(膜孔徑:0.45um)西伯利亞遠(yuǎn)志糖A6Human, Mouse, Rat

弗氏*佐劑（美國SIGMA）西藏棱子芹（標(biāo)準(zhǔn)品）Human