血糖試劑盒（GOPOD酶法）公司正*的產(chǎn)品：9075-65-4α-甘油磷脫氫CASPASE-6蛋白免疫共沉淀分析試劑盒
青春雙歧桿菌CASPASE-6蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
OCT II mRNA原位雜交試劑盒細胞CASPASE-7蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒
9001-19-8高峰α-淀粉載玻片細胞CASPASE-7蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標儀、離心機,、移液器,、96孔板、研缽,、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1ml提取液）,，進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

2、血清（漿）樣品：直接檢測,。

注意事項

1,、試劑三為酶，不可冷凍,，使用時在冰上放置,。

2、對照管只需要做一管,。

3,、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍,？

對照管的范圍是0.4-1,。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數(shù),；（2)沒有按順序加試劑,；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）,。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù),。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,，通常可以使測定正常,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍,。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品,。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例,， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品,。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測,。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量,，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍,。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存,；如果當天不能完成測定,，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定,。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,，配制適量WST-8酶工作液,，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下,，然后適當混勻后再使用,。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,，即為反應(yīng)啟動工作液,。4℃或冰浴保存，可當天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml,，10U/ml ,，5U/ml，2.5U/ml,，1.25U/ml,，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,，參考樣品進行檢測,。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用,；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考,。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔,。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始,，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘,。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘,。

c. 450nm 測定吸光度,。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片,。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定,。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,，則通常需要把該樣品重新測定,。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高,，則需適當稀釋樣品,；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品,。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時,，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種,，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算,。

測定步驟：

1、 酶標儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至450nm,。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,，用多少配多少,。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3,、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二,，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周,。（若一次性測定樣本較少,，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5,、 樣本測定

兔子端粒(TE)試劑盒α-淀粉（枯草桿菌）芴氧羰-O-叔丁-D-蘇氨 98%磷標準溶液 100μg/ml,u=3%（劇品）

兔子單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒高峰α-淀粉FMOC-L-色氨五氟苯酯    98.0%三標準溶液 10μg/ml,u=6%（劇品）

兔子單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒高溫α-淀粉Fmoc-D-Trp-OPfp 98%異惡草 分析標準品,，98%

兔子促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)試劑盒β-淀粉N-Fmoc-O-芐-L-磷酪氨 98%硫線磷 分析標準品，92%

兔子促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)試劑盒β-淀粉Fmoc-Tyr(tBu)-OPfp 98.5%磺隆 分析標準品,，94%

兔子促卵泡素(FSH)試劑盒果膠Fmoc-O-磷-L-酪氨 98%環(huán)嘧磺隆 分析標準品,，96%

兔子促卵泡素(FSH)試劑盒果膠Fmoc-Tyr(PO<SUB>3</SUB>Bzl<SUB>2</SUB>)-OH 98.5%殺鼠 分析標準品，99%

兔子促狀腺素(TSH)試劑盒果膠FMOC-L-纈氨五氟苯酯  98.0%鼠 分析標準品,，98%

兔子促狀腺素(TSH)試劑盒果膠FMOC-L-苯氨五氟苯酯  96%敵草快 分析標準品,，96%

兔子雌二(E2)試劑盒果膠Y-23N-酰-DL-色氨 98%2,5-二苯氧乙標準溶液100μg/ml，溶劑：

兔子雌二(E2)試劑盒果膠Y-23N-Fmoc-N'-Boc-L-2,3-二氨   97%惡唑 分析標準品,，95%

兔子腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒菠蘿蛋白Fmoc-D-3-(1-萘)氨 ≥98.5% 分析標準品,，99.3%

兔子腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒菠蘿蛋白Fmoc-3-(1-萘)-L-氨 98%標準溶液 10μg/ml,u=5～3%，

兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒 菠蘿蛋白Fmoc-3-(2-萘)-D-氨 98% 硫新斯的明 98%

兔子表皮生長因子(EGF)試劑盒 菠蘿蛋白Fmoc-3-(2-萘)-L-氨 98%二磷 分析標準品,98%

兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒菠蘿蛋白FMOC-D-3-(3-吡啶)-氨 98%二磷標準溶液 10μg/ml,u=6～4%,，
血糖試劑盒（GOPOD酶法）β淀粉樣肽（25-35）抗體β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)檢測試劑盒BACE1

血管緊張素I抗體β葡萄糖醛苷(βGD)檢測試劑盒βGD

上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)β葡糖苷(β-glucosidase)檢測試劑盒β-glucosidase

ADP核糖化因子結(jié)合蛋白2抗體β內(nèi)酰抑制劑(BLI)檢測試劑盒BLI

精氨加壓素受體2抗體β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)檢測試劑盒β-EPR

凋亡相關(guān)斑點樣蛋白ASC抗體β內(nèi)啡肽(β-EP)檢測試劑盒β-EP

絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體β萘酚(β-Nph)檢測試劑盒β-Nph

抗凝血3抗體β萘酚(β-naphthol)檢測試劑盒β-naphthol

人血清白蛋白單克隆抗體β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)檢測試劑盒β-Cat