產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱：乳酸桿菌屬通用PCR檢測試劑盒
英文名稱：Lactococcus spp. PCR

規(guī)格：50T

分類：PCR檢測試劑盒

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。

公司產(chǎn)品僅用于科研運(yùn)輸：低溫,、避光,，快遞免費(fèi)送貨上門。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix （2mM）

4 μl     引物1（10pM）

2 μl     引物2（10pM）

2 μl     Taq酶 （2U/μl）

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl      加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保7min。

3：PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

使用方法:
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7,，6，5,，4,，3，2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,，*用帶芯槍頭，下同）,。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL,，試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù),，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板）,，1 個(gè)用于PCR 陽性對(duì)照,。
實(shí)驗(yàn)外包:

1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測,、DNA甲基化檢測,、生物信息學(xué)分析

2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片,、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片,、RNA-seq

3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE,、SILAC、iTRAQ,、TMT,、Label-free、MRM

4.基因檢測：DNA/RNA提取,、RT-PCR,、Real-timePCR

5.蛋白質(zhì)檢測：Western blot、Co-ip  EMSA,、CHIP,、熒光、ELISA

6.病理檢測：HE染色,、特殊染色,、組織切片、組化,、流式細(xì)胞分選

7.代謝組學(xué)：GC-MS,、LC-MS、NMR

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