γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒公司正*的產(chǎn)品：518-17-2標(biāo)準(zhǔn)品冰凍切片組織CASPASE-6蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
γ-倒捻子素CAS:31271-07-5石蠟切片組織CASPASE-6蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
短波單胞菌載玻片細胞CASPASE-6蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
1317-61-9四氧化三鐵冰凍切片組織CASPASE-6蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機,、移液器,、96孔板、研缽,、冰和蒸餾水

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

粗酶液提?。?/span>

1、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1ml提取液）,，進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測,。

 

測定步驟：

1,、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm,。

2,、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少,。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋,。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二,，充分混勻,。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少,，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4,、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5,、 樣本測定

注意事項

1,、試劑三為酶，不可冷凍,，使用時在冰上放置,。

2、對照管只需要做一管,。

3,、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍,？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低,，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù),；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠,，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）,。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管,，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細胞樣品的準(zhǔn)備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍,。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品,。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例,， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品,。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) ,。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測,。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品,。例如,，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,，可以冰浴保存,；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存,，但建議盡量當(dāng)天完成測定,。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,，配制適量WST-8酶工作液,，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下,，然后適當(dāng)混勻后再使用,。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,，即為反應(yīng)啟動工作液,。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ,，5U/ml,，2.5U/ml，1.25U/ml,，0.625U/ml,。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測,。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降,， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考,。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔,。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始,，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘,。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘,。

c. 450nm 測定吸光度,。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片,。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定,。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,，則通常需要把該樣品重新測定,。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高,，則需適當(dāng)稀釋樣品,；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品,。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit),。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種,，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當(dāng)換算。

兔子免疫球蛋白E(IgE)試劑盒5′-核苷(5′-NT)試劑盒(鉬藍比色法)L-天門冬二氨 98%菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

兔子免疫球蛋白A(IgA)試劑盒 α-羥丁脫氫(α-HBD)試劑盒(速率法)N-Fmoc-N'-三苯-D-天冬酰 98%菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%

兔子免疫球蛋白A(IgA)試劑盒 α-羥丁脫氫(α-HBD)試劑盒(速率法)Fmoc-L-天冬氨-1芐脂 98.5%百菌清 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，99%

兔子可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒α-巖藻糖苷(AFU)試劑盒(PNP-F終點微板法)N-芴氧羰-L-天冬氨 1-芴酯 98%百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%

兔子可溶性血管粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒β-半乳糖苷(GAL)試劑盒(PNP微板法)FMOC-D-天冬氨-1-叔丁酯  98%百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%

兔子可溶性間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒β-半乳糖苷(GAL)試劑盒(PNP微板法)芴氧羰-天冬氨-4環(huán)己脂 98%磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，92%

兔子可溶性間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒銅藍蛋白(CP)試劑盒(鄰聯(lián)茴香比色法)N-芴氧羰-BETA-叔丁-L-天冬氨五氟苯酯 98%嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，98.5%

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒銅藍蛋白(CP)試劑盒(鄰聯(lián)茴香比色法)N-芴氧羰-S-乙酰-L-半胱氨五氟苯酯  98%滅蠅 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%

兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒輔Q10(Co10)試劑盒(比色法)FMOC-S-三苯-L-半胱氨五氟苯酯  98%滅蠅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%

兔子巨噬炎性蛋白5(MIP-5)試劑盒輔Q10(Co10)試劑盒(比色法)N-Fmoc-S-三苯-D-半胱氨  98%滅蠅標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=2%

兔子巨噬炎性蛋白5(MIP-5)試劑盒二(MDA)試劑盒(TBA微板法)FMOC-L-谷氨酰五氟苯酯  98%草津 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，98%

兔子性成纖維生長因子(bFGF)試劑盒 二(MDA)試劑盒(TBA比色法)N-α-Fmoc-N-γ-三苯游-L-谷氨五氟苯酯  97%霜脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，98.5%

兔子性成纖維生長因子(bFGF)試劑盒 二(MDA)試劑盒(TBA比色法)N-Fmoc-N'-三苯-D-谷氨酰 98%順式菊酯  分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

 兔子免疫球蛋白M(IgM)試劑盒 二(MDA)試劑盒(TBA熒光法)芴氧羰-L-谷氨 1-叔丁酯 98%四螨 分析標(biāo)準(zhǔn)品,，98.6%

 兔子免疫球蛋白M(IgM)試劑盒 二(MDA)試劑盒(TBA熒光法)N-[(9H-芴-9-氧)羰]-L-谷氨-5-叔丁-1-五氟苯酯 98%四螨標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%

兔子狀腺素(T4)試劑盒植物二(MDA)試劑盒(TBA比色法)Fmoc-His(MMt)-OH 98%四螨標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%
γ-氨基丁酸(GABA)含量試劑盒β-氨乙咪唑

苯并噻唑

苯駢三氮唑

硝化四氮唑

硝紫四唑

磺異噁唑

硝唑

卡巴唑

藍四唑