實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),,懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基細胞
英文名稱:L15
貨號:BJ-01X1999
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購買到貨后,,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實驗室擴增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,*進口來源,*保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無細菌,、真菌、支原體污染,。 細胞到達客戶手中,,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,,我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測,。
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基,。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,,裝滿37℃的水,,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中),。輕輕晃動凍存管,,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃),。注意凍存管管口不能沒入水中,,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),,將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,,降低DMSO濃度,,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),。
4)800rpm離心5min,,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,吹打制成細胞懸液,。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞,。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代,。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
豬胰島素降解(IDE)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒聚乙烯吡咯烷橡膠PTFE墊片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特熒光燃料,,33342 98%
豬肝脂 (LIPC)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒聚乙烯吡咯烷中空純四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞內(nèi)鈣熒光探針BAPTA, AM 95%
豬補體片段3b(C3b)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 聚乙烯吡咯烷橡膠覆PTFE墊片,匹配30Zss黑色低蓋,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素 90%
豬血紅蛋白β(HBβ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1,,3-二羥橡膠覆PTFE墊片,匹配500MLZPA棕色瓶低蓋,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素乙酰酯1 mg/ml,溶劑:DMSO
豬α2纖溶抑制因子(α2-PI)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1,3-二羥500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素乙酰酯Mixed isomers
豬促血管生成素1(ANG1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1,,3-二羥30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧熒光素 95%
豬剪切修復(fù)交叉互補因1(ERCC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1,,3-二羥PTFE墊片,匹配2ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ9*1.55-羧熒光素 95%
豬封閉蛋白3(CLDN3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 4-氨安替比林PTFE墊片,匹配3ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ11.8*1.55-羧四羅丹明 95%
豬粒集落激因子受體(GCSFR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-氨安替比林白凡士林 醫(yī)用級5-羧熒光素琥珀酰亞酯 90%
豬蛋白酪氨磷受體J(PTPRJ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-氨安替比林黃凡士林 醫(yī)用級5(6)-羧熒光素 95%
豬促狀腺激素胚胎因子(TEF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-氨苯乙氫加蘭他敏 98%5(6)-羧熒光素琥珀酰亞酯 96%
豬活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-氨苯乙2,2,6-三-4H-1,3-二噁英-4- 90%6-羧熒光素琥珀酰亞酯 90%
豬糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-氨苯乙Amberlite? IR-120陽離子交換樹脂 鈉型6-羧四羅丹明 for fluorescence, ≥90%
豬磷脂爬行1(PLSCR1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-氨苯乙Amberlyst® 15離子交換樹脂 濕6-羧四羅丹明琥珀酰亞酯 for fluorescence
豬甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 4-氨苯乙Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂 20-60 mesh4,’6-二脒-2-苯吲哚 98%
豬尿激型纖溶原激活因子受體(PLAUR/uPAR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-氨苯乙Amberlite XAD7HP 離子交換樹脂 Mesh 20-60二氫羅丹明123 95%
L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基細胞過硫銨琥珀銨金精三羧銨
銨磷鉬銨磷二氫四丁銨
磷氫鈉銨硫銨硫代乙銨