詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號,;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì),、RNA提取,、cDNA合成、qPCR,。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。
中文名稱 | 人線粒體DNA PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T |
保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
人可溶性細(xì)胞因子受體(sCKR)試劑盒elisahuman ai-nucleosome aibody IgG, AnuA-IgG Elisa Kit
人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒 Human SS-B/La Aibody, Elisa Kit
人可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒Human Pemphigus Foliaceus, PF Elisa Kit
人可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒 Human β2-Glycoprotein 1 aibody IgA, β2-GP1 Ab IgA Elisa Kit
人可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒Human β2-Glycoprotein 1 Aibody IgM, β2-GP1 Ab IgM Elisa Kit
人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA檢測試劑盒 Human β2-Glycoprotein 1 Aibody IgG, β2-GP1 Ab IgG Elisa Kit
人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA檢測試劑盒Human ai-cardiolipin aibody IgA, ACA-IgA Elisa Kit
人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)試劑盒 ELISAHuman ai-cardiolipin aibody IgM, ACA-IgM Elisa Kit
人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)檢測試劑盒elisaHuman ai-cardiolipin aibody IgG, ACA-IgG Elisa Kit
人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)試劑盒 ELISAHuman ai-golgi apparatus aibody, AGAA Elisa Kit
人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)檢測試劑盒elisaHuman Chlamydia trachomatis, CT Elisa Kit
人可溶性間皮素相關(guān)肽(SMRP)ELISA檢測試劑盒human S100 calcium binding protein A9/calgranulin B, S100A9 Elisa Kit
人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)試劑盒 ELISAhuman S100 calcium binding protein A8/calgranulin A, S100A8 Elisa Kit
人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)elisa試劑盒human proviral iegration site 1, Pim1 Elisa Kit
人線粒體DNA PCR檢測試劑盒Protein Kinase, AMP Activated Beta 1 (PRKAb1)suan脫氫酶激酶同工酶1(PDK1)重組蛋白
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Alpha-1-Aitrypsin (a1AT)suan脫氫酶激酶同工酶2(PDK2)重組蛋白
Alpha-1-Aitrypsin (a1AT)suan脫氫酶激酶同工酶3(PDK3)重組蛋白
Alpha-1-Aitrypsin (a1?