詳細(xì)介紹
實驗外包:
1.基因組學(xué):基因芯片,、SNP檢測,、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片,、LncRNA芯片,、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE,、SILAC,、iTRAQ、TMT,、Label-free,、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR,、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測:Western blot,、Co-ip EMSA、CHIP,、熒光,、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色,、組織切片,、組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS,、LC-MS,、NMR
8.細(xì)胞及動物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型,、動物模型構(gòu)建
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:遲鈍愛德華菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Edwardsiella tardaPCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。
公司產(chǎn)品僅用于科研運輸:低溫,、避光,,快遞免費送貨上門。
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PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min,。
3:PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,,6,,5,4,,3,,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,,*用帶芯槍頭,,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,,多出的一個用作樣品制備陽性對照管,、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三,、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如果做定性分析,,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照,。
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