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詳細(xì)介紹
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。
中文名稱 | 駑巴貝斯蟲PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 | Babesia caballiPCR |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T |
保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一,、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無(wú)到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,，不加或添加石蠟油,。 |
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量）和定性分析,。
主要服務(wù)：DNA或RNA的絕對(duì)定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì),、RNA提取、cDNA合成,、qPCR,。
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