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洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒: 返回列表頁

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更新時間：2023-04-06 16:22:44瀏覽次數(shù)：268

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產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	50T
應(yīng)用領(lǐng)域	環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè)	主要用途	僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱	Burkholderia cepaciaPCR	規(guī)格	50T
分類	PCR檢測試劑盒	保存條件	-20℃避光保存

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詳細(xì)介紹

服務(wù)流程：

接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。

中文名稱	洋蔥伯克氏菌PCR檢測試劑盒
英文名稱	Burkholderia cepaciaPCR
產(chǎn)品規(guī)格	50T

保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。

儲存條件：

僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2. 血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

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實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

二,、操作步驟

1. DNA模板

2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計,。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM

5．Taq酶

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求,，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。

4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量（包括絕對定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的絕對定量分析,、基因表達(dá)差異分析,、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR,。

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