堿性磷酸酶(AKP/ALP)試劑盒公司正熱銷的產(chǎn)品：流產(chǎn)布魯氏菌 生物Ⅵ型載玻片細胞CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
DL-高絲氨CAS:1927-25-9冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
81-25-4膽（牛）石蠟切片組織CASPASE-9蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
11－酮基乳香CAS:17019-92-0載玻片細胞CASPASE-9蛋白表達NBT顯色

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標儀,、離心機,、移液器,、96孔板、研缽,、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W，超聲3s,，間隔10s,，重復30次）；8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1ml提取液）,，進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測,。

注意事項

1、試劑三為酶,，不可冷凍,，使用時在冰上放置。

2,、對照管只需要做一管,。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,，對照管數(shù)值在什么范圍,？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低,，可以適當減少稀釋倍數(shù),；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠,，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）,。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù),。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,，通常可以使測定正常,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍,。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品,。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例,， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) ,。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品,。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) ,。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測,。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品,。例如,，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,，可以冰浴保存,；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存,，但建議盡量當天完成測定,。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表,，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,，可當天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降,，必須注意在使用前先輕輕離心一下,，然后適當混勻后再使用,。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,，即為反應(yīng)啟動工作液,。4℃或冰浴保存，可當天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml,，10U/ml ,，5U/ml，2.5U/ml,，1.25U/ml,，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,，參考樣品進行檢測,。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用,；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分,，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔,。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差,。

b. 37℃孵育30分鐘,。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性,，推薦孵育30分鐘,。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片,，可以使用420-480nm 的濾光片,。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對照3,，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),。如果測定出來的抑制百分率偏高,，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低,，則需重新準備濃度較高的待測樣品,。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時,，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種,，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算,。

測定步驟：

1、 酶標儀預熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至450nm,。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,，用多少配多少,。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3,、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二,，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周,。（若一次性測定樣本較少,，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）,。

5,、 樣本測定

大鼠干因子受體(SCFR)試劑盒雙縮脲總蛋白試劑鎢粉 99.98% metals basis,1-5μm正癸 98%

大鼠質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)試劑盒 雙縮脲蛋白定量試劑盒硒 99%正癸 Standard for GC,>99% (GC)

大鼠質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)試劑盒 雙縮脲蛋白定量試劑盒硫 ACS正癸 ≥98%, FCC, FG

大鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)試劑盒雙縮脲試劑(AB液)硫氫化鈉，水合 68-72 %正癸 AR,，99%

大鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)試劑盒雙縮脲試劑(AB液)硫鈉 ACS正癸 CP,，98%

大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激2(Tie-2)試劑盒紫外法蛋白定量試劑盒乙酰苯 AR,99.0%正癸 分析標準品,≥99.5% (GC)

大鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激2(Tie-2)試劑盒紫外法蛋白定量試劑盒乙酰苯 CP,99.0%十二 Standard for GC,>99.5%(GC)

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)試劑盒改良Lowry法蛋白濃度測定試劑盒分析標準品，C:71.09%,H:6.71%,N:10.36%十二  >98.0% (GC)

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)試劑盒改良Lowry法蛋白濃度測定試劑盒乙酰苯 99.8%,，升華純化十二  >99.0%(GC)

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)試劑盒考馬斯亮藍G250染料試劑乙酰苯 99.95%,，升華純化1-二十二 80-85%

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)試劑盒考馬斯亮藍快速染色液莰烯  75%甘油 AR,99%

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)試劑盒考馬斯亮藍快速染色液(±)-樟腦（合成） 96%甘油 EP, BP, JP, USP級

大鼠質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)試劑盒常規(guī)考馬斯亮藍染色液乙異龍腦酯 90%正己 98%

大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒常規(guī)考馬斯亮藍染色液2-苯乙 CP,98%十六 CP,97%

大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒常規(guī)考馬斯亮藍染色洗脫液水楊 ACS, ≥99.0% 十六 98%

大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒常規(guī)考馬斯亮藍染色洗脫液苯 standard for GC, ≥99.5% (GC)月桂 natural, ≥98%, FCC
堿性磷酸酶(AKP/ALP)試劑盒T4 DNA 激香葉木素-7-O-葡萄糖苷（標準品）Human

重組Taq DNA 聚合香葉木素（標準品）Human

重組Taq DNA 聚合香櫞(枸櫞)（標準品）Human

重組Taq DNA 聚合香櫞（標準品）Human, Mouse, Rat

重組Taq DNA 聚合香紫蘇(標準品)Human

動物RNAout(快速動物總RNA提取試劑)香紫蘇內(nèi)酯(標準品)Human, Mouse, Rat

植物RNAout（植物RNA提取試劑）襄五脂素Human, Mouse, Rat

血液RNAout(血液總RNA提取試劑)消旋山莨菪(標準品)Human, Mouse

病RNAout(病RNA提取試劑)小白菊內(nèi)酯(標準品)Human, Rat