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塞姆利基森林病毒PCR檢測(cè)試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn)
英文名稱(chēng) Semliki Forest Virus(SFV)RTPCR 規(guī)格 50T
分類(lèi) PCR檢測(cè)試劑盒 保存條件 -20℃避光保存
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詳細(xì)介紹

實(shí)驗(yàn)外包:

1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè),、DNA甲基化檢測(cè),、生物信息學(xué)分析

2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片,、表達(dá)譜芯片,、RNA-seq

3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC,、iTRAQ,、TMT、Label-free,、MRM

4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取,、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot,、Co-ip  EMSA,、CHIP、熒光,、ELISA

6.病理檢測(cè):HE染色,、特殊染色,、組織切片、組化,、流式細(xì)胞分選

7.代謝組學(xué):GC-MS,、LC-MS、NMR

8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞,、細(xì)胞模型,、動(dòng)物模型構(gòu)建
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng):塞姆利基森林病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Semliki Forest Virus(SFV)RTPCR

規(guī)格:50T

分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒

儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。

公司產(chǎn)品僅用于科研運(yùn)輸:低溫,、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén),。
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9.jpg

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

PCR儀有無(wú)熱蓋,,不加或添加石蠟油,。

2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,在72℃ 保7min,。

3:PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。

4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

使用方法:
一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例),。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,,6,,5,,4,3,,2,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,,下同),。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用,。
二,、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),,1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照,。
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