中文名稱:Caspase 6 活性檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Caspase 6 Activity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20次|100次
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中caspase 6酶活性或純化的caspase 6酶活性的試劑盒,。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過(guò)100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè)時(shí),除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測(cè)20個(gè)樣品,。
Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用的蛋白酶家族,。Caspase 6也稱Mch-2,,有時(shí)被寫作caspase-6或caspase 6,,最初從人的Jurkat細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。Caspase 6的前體被granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚體,,而活化的caspase 6被發(fā)現(xiàn)可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,。Caspase 6可以剪切PARP和keratin-18,也可以剪切細(xì)胞核核被膜上的關(guān)鍵組成蛋白Lamin A,。Caspase家族中僅caspase 6可以剪切Lamin A,。Caspase 6對(duì)于Lamin A的識(shí)別位點(diǎn)是VEID。本試劑盒利用了caspase 6對(duì)于VEID識(shí)別的特異性,,設(shè)計(jì)了相應(yīng)的caspase 6特異的顯色底物Ac-VEID-pNA,。 |
本Caspase 6活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase 6可以催化底物Ac-VEID-pNA(acetyl-Val-Glu-Ilel-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)檢測(cè)caspase 6的活性,。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收,。
試劑盒中提供了caspase 6催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 6酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品,。
試劑盒組分:
裂解液——————8ml
檢測(cè)緩沖液——————8ml
Ac-VEID-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
儲(chǔ)存條件:-20℃,。
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療,。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會(huì)影響使用效果。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,。
5、最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果,。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
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其他植物血凝素
英文名稱:PHA
其他英文名稱:Phytohemagglutinin
產(chǎn)品規(guī)格:BR
包裝:1克
CAS號(hào):9008-97-3
相對(duì)分子量:121000~132000
級(jí)別:BR
原理:PHA系有絲分裂原,,可刺激T細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中轉(zhuǎn)化為體積較大的母細(xì)胞,核內(nèi)生成核仁,,部分細(xì)胞發(fā)生分裂
性狀:粉末
用途:生化研究,。用于細(xì)胞體外培養(yǎng);用于細(xì)胞功能及染色體的研究等,。
保存:2~8°C,,避光,有效期2年
操作規(guī)程:
1,、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻,。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)