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人牛血清白蛋白(BSA)elisa試劑盒操作步驟及準備事項
閱讀:914 發(fā)布時間:2018-11-12人牛血清白蛋白(BSA)elisa試劑盒
[試劑準備]
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
[操作步驟]
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設置標準品孔和樣本孔,,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加,。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板),。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL,37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值,。
[實驗結果計算]
以所測標準品的OD值為橫坐標,,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,,并得到直線回歸方程,,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度,。