培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
熒光染料PKH67 是一種可對活細胞進行熒光標(biāo)記的新型染料,,可以標(biāo)記活體細胞,,通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細胞。對細胞毒性較小,,熒光背景低,,脂溶性高,能夠輕易穿透細胞膜,,有著強而穩(wěn)定的綠色熒光,。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會使鄰近細胞染色的功能,。 |
在細胞分裂增殖過程中,,PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減,標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,,因此其熒光強度是親代細胞的一半,,根據(jù)這一特性,它可被用于檢測細胞增殖,,細胞周期的估算及細胞分裂等方面,。PKH67標(biāo)記細胞的熒光非常均一,,并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中,,PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,,熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半,通過流式細胞儀根據(jù)熒光強度的不同,,可檢測出未分裂細胞,,分裂一次(1/2的熒光強度),二次(1/4的熒光強度),,三次(1/8的熒光強度),,以及更多分裂次數(shù)的細胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達六次甚至更多,。
除了用于細胞增殖檢測,,PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內(nèi)示蹤,標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達穩(wěn)定,,陽性標(biāo)記率達98%以上,,標(biāo)記細胞形態(tài)良好,能有效地觀察細胞在體外的誘導(dǎo)分化情況,;或?qū)?biāo)記的細胞注入體內(nèi),,可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。
PKH67標(biāo)記的細胞用于體內(nèi)觀察可以長達數(shù)周之久,,它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗,。PKH67 毒性較小,不影響細胞的增殖能力,。此方法操作簡單,,且不用放射性同位素,不存在安全隱患,??梢愿焖?,更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù),。
PKH67標(biāo)記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。
PKH67標(biāo)記細胞呈綠色熒光,,熒光波長:λex=490 nm,λem=502 nm,。
儲存條件:-20℃避光保存。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
阿利多(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dexamethasone AcetateCD44V5抗體包裝25g
阿侖磷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dexamethasone Acetate22號染色體開放閱讀框23抗體包裝5g
阿莫西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trimethoprim角蛋白19抗體包裝1g
阿尼西坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trimethoprim1號染色體開放閱讀框147抗體包裝5g
阿齊沙坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sivelestat sodium 膽固21-羥化抗體包裝1g
阿奇霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nevirapine畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端)包裝25g
阿米特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nevirapine補體C1qL3鏈多肽抗體包裝5g
阿司咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfamethoxazole(SMZ)腫瘤/抗原27抗體(高遷移率族蛋白)包裝100g
阿糖腺苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfamethoxazole(SMZ)1號染色體開放閱讀框228抗體包裝25g
阿替洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefpirome Sulfate碳酐3抗體包裝5g
阿托伐醌,阿托喹酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefpirome Sulfate親環(huán)蛋白(親環(huán))PPIA抗體包裝1g
阿魏鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amisulpride鈣網(wǎng)蛋白抗體包裝250mg
阿魏哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amisulpride腫瘤/抗原65包裝5g
阿西美辛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenofibric acid2號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
阿昔莫司,,阿西莫司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenofibric acid伴侶蛋白9抗體包裝5g
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR,可用于培養(yǎng)血管生成4試劑盒Α-香樹脂酮;α-Amyrenone
沃遜納爾沙門氏菌Salmonella│wassenaar 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血管生成2試劑盒相思豆;L-Abrine
: HBUM84819資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%血管生成1試劑盒相思子堿;L-Abrine
PKH67細胞增殖與毒性檢測試劑盒氧化銩
其他 銩氧,;三氧化二銩;三價氧化銩,;三氧化二銩(III)
英文名稱: Thulium oxide
其他英文名稱: Thulium(III) oxide,;Thulia
產(chǎn)品規(guī)格: 3N
包 裝: 5克/25克/100克
產(chǎn)品規(guī)格: SP
包 裝: 1克
CAS號:12036-44-1
Tm2O3=385.87
級別:SP
級別:3N
含量:≥99.9%
稀土雜質(zhì):≤2000ppm
性狀:帶綠色致密粉 末。在空氣中易吸收水分和二氧化碳,。加熱后有紅色閃光,,繼續(xù)加熱轉(zhuǎn)黃色再恢復(fù)到。能緩慢地溶于強,。相對密度8.6,。有刺激性
用途:生化研究。金屬銩
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