操作規(guī)程:
1,、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3,、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×00
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
用途: 檢測細(xì)胞自噬
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儲存條件:-20℃,,避光,12個(gè)月
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失,。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果,。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5,、最好使用一次性吸頭,、管、瓶或玻璃器皿,,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。
7,、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存,。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,,從而影響檢測結(jié)果,。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物,。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,,如果吸光度相對較大,,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測,。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞,。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間,。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
肉蓯蓉苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4'-Hydroxyazobenzene-4-carboxylic Acid Hydrate谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移κ抗體包裝50g
肉豆蔻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carboxymethoxylamine Hemihydrochloride半乳糖激1抗體包裝1g
肉豆蔻木脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Girard's Reagent P糖原蛋白2抗體包裝5g
肉豆蔻,十四烷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione磷半乳糖尿苷轉(zhuǎn)移1抗體包裝1ml
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-tert-Butyl-α-phenylnitrone糖原蛋白1抗體包裝5g
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 16-DOXYL-stearic Acid Free Radical葡萄糖合成2抗體包裝250mg
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CLA谷草轉(zhuǎn)2抗體包裝10g
肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MCLA葡萄糖-6磷脫氫抗體包裝250g
肉桂葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: FCLA Free Acid葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體包裝50g
乳香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Red-CLA葡萄糖合成1抗體包裝1g
瑞香/祖師麻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: IsoluminolG蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體包裝250mg
塞骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bis[3,4,6-trichloro-2-(pentyloxycarbonyl)phenyl] Oxalate甘油激3抗體包裝25g
噻二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Disodium 8-Amino-1,3,6-naphthalene 3sulfonate Hydrate高爾基體磷蛋白3樣蛋白抗體包裝1g
噻二苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coumarin 102磷化谷受體1抗體包裝5g
賽門苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coumarin 314G蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝1g
細(xì)胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)葡萄穗霉Stachybotrys│chartarum 質(zhì)量規(guī)格:>98%尿苷二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移1試劑盒蘿卜硫苷;Glucoraphanin
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%鳥苷結(jié)合蛋白4試劑盒藜蘆基;3,4-Dimethoxybe
肺炎克雷伯氏菌Klebsiella│pneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:含量測定鳥苷交換因子試劑盒藜蘆;Veratraldehyde