操作規(guī)程:
1、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無(wú)細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
中文名稱:mTOR抑制劑(XL388)
英文名稱:XL388 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 發(fā)貨周期:1~3天 XL388是ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTOR選擇性抑制劑,,IC50為9.9nM,,相對(duì)于與PI3K相關(guān)的激酶有1000倍的選擇性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1251156-08-7 純度:98.76% 分子量:455.5 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,,不可用于診斷或治療。
2,、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失,。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果,。
4,、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5,、最好使用一次性吸頭,、管、瓶或玻璃器皿,,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸,。
7,、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,,否則將會(huì)增加空白吸收,,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光,。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物,。如果待測(cè)藥物有還原性,,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè),。
9,、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可,。
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變黃羅倫隱球酵母Burkholderia cepacia豬鏈球菌elisa試劑盒
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灰腐質(zhì)霉Burkholderia vesicularis豬戊型肝炎病抗原elisa試劑盒
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14-3-3β抗體木糖氧化產(chǎn)堿菌反硝化亞種阿柏丁沙門(mén)氏菌
突觸足蛋白抗體印度拜葉林克氏菌山夫登堡沙門(mén)氏菌
mTOR抑制劑(XL388)Na-甲酰-L-精酰胺鹽鹽
其他Na-甲酰-L-精
英文名稱:BAA
其他英文名稱:Na-Benzoyl-L-argininamide hydrochloride monohydrate
產(chǎn)品規(guī)格:BR,98%
包裝:5克
CAS號(hào):965-03-7
C13H19N5O2•HCl•H2O=331.8
級(jí)別:BR
含量:≥98.0%
比旋光度:+4~+6°(C=2,,H2O)
性狀:結(jié)晶,溶于水
用途:生化研究
保存:2~8℃