培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),;
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè),。
產(chǎn)品屬于:
商品介紹:
AZM475271是Src激酶高效選擇性抑制劑,,IC50值為5nM,對(duì)Flt3,、KDR和Tie-2抑制劑弱(IC50>10uM),。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):476159-98-5 別名:M475271 純度:99.19% 分子量:442.94 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
裂褶菌Halomonas sp.
大腸埃希氏菌Marinobacter sp.
擬莖點(diǎn)霉Corynebacterium ammoniagenes
細(xì)孢毛霉Microbacterium sp.
銅綠假單胞菌Halorubrum sp.
茶樹(shù)菇Halorubrum californiensis
乳桿菌屬Halorubrum sp.
Pilidium concavumHalorubrum sp.
沼澤紅菇Halorubrum sp.
UNNASH/DF-1 Flavobacterium cheniae
菌褶輪枝菌Enterococcus hirae
金黃硬皮馬勃Lactobacillus plantarum
熒光假單胞Flavobacterium sp.
玫煙色棒束孢Halomonas xianhensis
鏈霉菌Rhodococcus qingshengii
微黃原小單孢菌Sphingobacterium siyangensis
類芽孢桿菌Paenibacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
核盤(pán)菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%(T),標(biāo)準(zhǔn)品
Src激酶抑制劑(AZM475271)L-阿拉伯樹(shù)膠糖
其他L-阿糖;L-樹(shù)膠糖,;貝他米松-21-酯,;L-阿拉伯糖;L-(-)-阿糖,;L-(-)-阿拉伯糖
英文名稱:L-(-)-Arabitol
其他英文名稱:L-Arabinitol
產(chǎn)品規(guī)格:BR
包裝:1克/5克/25克/100克
CAS號(hào):7643-75-6
C5H12O5=152.15
級(jí)別:BR
含量:≥98%
重金屬:≤10ppm
性狀:粉末,。溶于水、90%乙
用途:生化研究,。
保存:RT
保存:2~8℃