商品介紹:
本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡便的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死檢測方法,。染色快速方便,兩種染料的染色僅需20-30分鐘,一步染色即可完成。使用方便,,使用流式細(xì)胞儀檢測時,,無需稀釋等配制過程,,也無需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測100個樣品,,每個樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬,。 |
試劑盒組份:
細(xì)胞染色緩沖液———100ml
Hoechst染色液———0.5ml
PI染色液——————0.5ml
本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)雙染的方法,。細(xì)胞發(fā)生凋亡時,,染色質(zhì)會固縮。
Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜,,染色后凋亡細(xì)胞熒光會比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng),。碘化丙啶(PI)不能穿透細(xì)胞膜,對于具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞不能染色,。而對于壞死細(xì)胞,,其細(xì)胞膜的完整性喪失,碘化丙啶(PI)可以染色壞死細(xì)胞,。上述兩種染料雙染后,,使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測時,正常細(xì)胞為弱紅色熒光+弱藍(lán)色熒光,,凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光+強(qiáng)藍(lán)色熒光,,壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光+強(qiáng)藍(lán)色熒光。參考下圖,,左圖為誘導(dǎo)凋亡前的正常細(xì)胞,,右圖為誘導(dǎo)凋亡后的細(xì)胞。
儲存條件:-20℃避光,,有效期一年,。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒 | Apoptosis and Necrosis Assay Kit | 100次 | 1~3天 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時,;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
血纖蛋白原(Fbg)elisa試劑盒英文名稱:Fbg ELISA Kit脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體包裝100g
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血清淀粉樣蛋白A(SAA)elisa試劑盒英文名稱:SAA ELISA Kit腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體包裝1g
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血紅素氧合酶1(HO-1)elisa試劑盒英文名稱:HO-1 ELISA Kitp53凋亡激蛋白1抗體包裝500g
血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)elisa試劑盒英文名稱:vWF ELISA KitP53凋亡激蛋白2抗體包裝250mg
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肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體白介素2(IL2)Orteronel(TAK-700) was selected as a candidate for clinical evaluation. orterone
細(xì)胞凋亡與壞死檢測試劑盒紫脲酸銨
其他氨基紫色酸,;紅紫酸銨,;骨螺紫;紫尿酸胺,;5,,5′-次氮基二巴比土酸銨鹽;5-((六氫-2,4,6-三氧代-5-嘧啶基)亞氨基)-2,4,6(1H,3H,5H)嘧啶三酮單銨鹽
英文名稱:Murexide
其他英文名稱:Acid ammonium purpurate,;Ammonium purpurate,;5,5′-Nitrilodibarbituric acid ammonium salt
產(chǎn)品規(guī)格:IND
包裝:25克
CAS號:3051-09-0
C8H8N6O6=284.19
級別:IND
絡(luò)合試驗(yàn):合格
灼燒殘?jiān)?/span>≤0.1%
性狀:紅紫色結(jié)晶性粉末,帶有綠色金屬光澤,。能與許多陽離子形成各種顏色的絡(luò)合物,。溶于熱水,微溶于冷水,,幾乎不溶于乙醇,。其水溶液呈深紫色,并隨pH值不同而不同,,在堿性溶液中呈深藍(lán)色,,在酸性溶液中為無色,。水溶液極易變質(zhì),。熔點(diǎn)>300℃,。大吸收波長(水中)520nm。
用途:生化研究,。絡(luò)合指示劑(用以滴定鈣,、銅、鈷,、鎳,、錳、鈧,、鋅等),。鈣的光度測定
用途:生化研究。酸堿指示劑
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