詳細介紹
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無菌絲綢布擦拭干凈,,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片),;
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測,。
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Cell Apoptosis Detection Kit(PI) | 100T | 1~3天 |
商品介紹:
熒光標記是研究細胞凋亡的基本方法,。細胞凋亡的形態(tài)學變化及生化學變化都可以通過熒光標記的的方法而檢測出來,從而區(qū)別鑒別出正常細胞,、凋亡細胞,、壞死細胞以及不同凋亡時期或細胞周期。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種DNA 結合性染料,,其激發(fā)和發(fā)射波長分別為536nm 和617nm,,產(chǎn)生紅色熒光,但無膜通透性,,不能透過活細胞膜,,只能染死細胞。 |
在熒光顯微鏡下觀察,,正常細胞不能著色,,早期凋亡細胞呈微弱紅光,晚期凋亡細胞紅光加強,,壞死細胞呈強紅色熒光,。采用流式細胞儀檢測細胞周期時,凋亡細胞因內(nèi)源性核酸酶被激活,,使DNA 廣泛降解,、斷裂,,DNA 結構發(fā)生劇變,隨著凋亡的進程,,DNA 斷裂產(chǎn)生的小分子量DNA 溢出胞外,,細胞總DNA 量降低,于正常G0/G1 細胞群前出現(xiàn)一DNA 低染細胞群,,即G1 峰前出現(xiàn)亞二倍體峰(sub-G1)或稱A0 細胞群,,即凋亡細胞群。用本試劑盒的PI 直接對細胞DNA 染色后,,進行流式細胞儀分析,,即可檢測到凋亡細胞DNA的變化。
儲存:2-8℃,,避光,,有效期一年。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
5、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大葉紫珠(標準品)英文名稱: Bromophenol red, sodium saltFAM153B蛋白抗體包裝5g
大棗(標準品)英文名稱: Butyl stearateFAM46C蛋白抗體包裝25ml
大皂角(標準品)英文名稱: C10E6舌癌耐藥相關蛋白1包裝1g
玳瑁(標準品)英文名稱: C12E10FAM129B蛋白抗體包裝5g
丹參(標準品)英文名稱: C12E9微管動力調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝1g
丹參(標準品)英文名稱: Calcium chloride, anhydrousFAM50A蛋白抗體包裝5g
丹參鈉(標準品)英文名稱: Calcium oxalate, monohydrateFAM113A蛋白抗體包裝5mg
丹參IIA(標準品)英文名稱: Calcium oxide (Lime) powderFAM150A蛋白抗體包裝25ml
丹參IIA-磺鈉(標準品)英文名稱: Calcium oxide lumpFRMD8蛋白抗體包裝5ml
丹參I(標準品)英文名稱: Calcium phosphate, monobasic, monohydrateFGFR1癌基因伴侶蛋白抗體包裝1g
丹酚A(標準品)英文名稱: Calcium pyrophosphateFAM家族蛋白40A抗體包裝5g
丹酚B(標準品)英文名稱: Canada balsamFAM55D蛋白抗體包裝1g
丹酚B二酯英文名稱: Caprolactam組織激活過氧化活化增生受體γ蛋白抗體包裝25g
丹酚C(標準品)英文名稱: Carboxypeptidase YFAM21C蛋白抗體包裝5g
丹酚D(標準品)英文名稱: Castor oilFAM13C1蛋白抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR神經(jīng)粘附分子配體1試劑盒去氫吳茱萸堿;Dehydroevodia
豬霍亂沙門氏菌Salmonella│choleraesuis 質(zhì)量規(guī)格:BR神經(jīng)特異性烯化試劑盒去澤拉木 ;Demethylzeyl
季氏畢赤酵母Pichia│guilliermondii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進口分裝神經(jīng)肽Nesfatin-1 elisa試劑盒13-去羥基印烏堿 ; 13-Dehyd
碘化丙啶PI染色試劑盒伍德合金
其他 鉍鉛錫鎘合金,;伍氏金,;武德金
英文名稱: Wood’s metal
其他英文名稱: Wood’s metal fusible
產(chǎn)品規(guī)格: AR
包裝:500克
CAS號:76093-98-6
級別:AR
結晶點:70.0~72.0℃
性狀:灰粒狀固體,。有光澤金屬。由鉍50%,、鉛26.7%,、錫13.3%、鎘 10%所組成的低熔點合金,。熔點 70℃,。
用途:生化研究。灑水噴灑系統(tǒng),。閥裝置
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