詳細介紹
中文名稱:Caspase 3分光光度法檢測試劑盒
英文名稱:Caspase-3 Colorimetric Assay Kit
產品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織caspase-3 檢測,。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,,其中caspase-3 為關鍵的執(zhí)行分子,,與DNA 斷裂,、染色質凝聚和凋亡小體形成有關,。Caspase-3 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,,沒有活性,;但在細胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,,活化的Caspase-3 由兩個大亞基和兩個小亞基組成,,裂解相應的胞漿胞核底物,,最終導致細胞凋亡,。Caspase-3 分光光度法檢測試劑盒就是將caspase-3 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團,。當該底物被Caspase-3 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,,可通過酶標儀或分光光度計(λ=405nm或400nm)測定其吸光值,,考察caspase-3 的活化程度。 |
注意事項
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用,。
2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-3 活化的機制,,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-3 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。
3. 細胞數(shù)量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,,因為Caspase-3 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關,如測定的OD 值偏低,,可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量,。
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,,不可用于診斷或治療,。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,,避免開蓋時試劑損失。
3,、禁止與其他品牌的試劑混用,,否則會影響使用效果。
4,、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果,。
5、最好使用一次性吸頭,、管,、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑,。
6,、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7,、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,,否則將會增加空白吸收,,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,,用避光袋或是黑紙,、錫箔紙包住避光。
8,、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物,。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度,。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,,則需要除去培養(yǎng)基,,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測,。
9,、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10,、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間,。
11,、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可,。
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銜接蛋白α-Adaptin抗體結締組織生長因子(CTGF)3-Methyladenine (3-MA) is a selective PI3K inhibitor for Vps34 and PI3Kγ with IC
Caspase 3分光光度法檢測試劑盒月桂酸
其他 十二酸;正十二酸,;十二烷酸
英文名稱: Lauric acid
其他英文名稱: Dodecanoic acid,;Laurostearic acid;Dodecoic acid,;Hendecane-1-carboxylic acid,;Undecane-1-carboxylic acid;Carboxylic acid C12
產品規(guī)格: 色標,,99%
包裝:5克
產品規(guī)格: CP,,98%
包裝:250克
CAS號:143-07-7
C12H24O2=200.32
級別:色標
含量:≥99.0%
熔點:41~44℃
級別:CP
含量:98.0~101.0%
熔點:41~45℃
灼燒殘渣:≤0.05%
性狀:針狀結晶或粉末。微有月桂油香,。易溶于苯和醇,,微溶于丙酮和石油醚。1g溶于1ml乙醇,、2.5ml丙醇,,不溶于水。半數(shù)致死量(小鼠,,靜脈)131±5.7mg/kg,。密度:0.869;沸點:298℃,;閃點: 156℃
用途:生化研究,。醇酸樹脂及潤濕劑、洗滌劑,、殺蟲劑的制備
保存:RT
操作規(guī)程:
1,、在96孔板加入細胞00μL/孔,,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,,需根據(jù)細胞的大小,,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2,、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結果分析
a,、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細胞),,各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細胞的OD 值,,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
b,、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)