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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | FS-X9558 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)elisa試劑盒英文名稱：TGFβ2 ELISA Kit自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體包裝10mg
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒英文名稱：TGF-β1 ELIS
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)elisa試劑盒英文名稱：TGFβ2 ELISA Kit自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體包裝10mg
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒英文名稱：TGF-β1 ELIS
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。 細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面,。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外,。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,，對(duì)PS有高度的親和性。因此,，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS,。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中,。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料,，可進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合,，能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性,，但其發(fā)射波譜較PI窄,，對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品,，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色,，以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。 |
操作步驟：
1,、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對(duì)于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用,。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí),，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下所有的貼壁細(xì)胞,，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi),。1000×g左右離心3-5分鐘,，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,，如果細(xì)胞沉淀不充分,，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液,，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞,，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清,。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞,。
b．對(duì)于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘,，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,，如果細(xì)胞沉淀不充分,，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞,，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,，小心吸除上清,，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞,。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞,。
2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水),。
3,、用250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞,，調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml。
4,、取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5,、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘,。
6、在反應(yīng)管中加400μl PBS,，流式細(xì)胞儀(FACS)分析,。
Jurkat細(xì)胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜
儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存
培養(yǎng)操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,，用無菌絲綢布擦拭干凈,，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）,；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出,，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
抗促狀腺素受體抗體(TRAb)elisa試劑盒英文名稱：TRAb ELISA Kit腺相關(guān)病5 VP1抗體包裝5MG
抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)elisa試劑盒英文名稱：α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit脂肪脫氫酶抗體包裝100g
抗Smith抗體(Sm)elisa試劑盒英文名稱：Sm ELISA Kit抗利尿激素1A抗體包裝25g
卷曲螺旋域結(jié)合蛋白80(CCDC80)elisa試劑盒英文名稱：CCDC80 ELISA Kit抗利尿激素受體1B抗體包裝5g
巨噬細(xì)胞移動(dòng)因子(MIF)elisa試劑盒英文名稱：MIF ELISA Kit二磷酸腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體包裝1g
巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)elisa試劑盒英文名稱：MIF ELISA Kitα增強(qiáng)子結(jié)合蛋白1抗體包裝5g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa試劑盒英文名稱：MIP-5 ELISA Kit脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)10抗體包裝250mg
巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa試劑盒英文名稱：MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白7抗體包裝1g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)elisa試劑盒英文名稱：MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體12抗體包裝5g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa試劑盒英文名稱：MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體9抗體包裝25g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)elisa試劑盒英文名稱：MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體包裝5g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa試劑盒英文名稱：MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體包裝100g
巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)elisa試劑盒英文名稱：MIP1α ELISA Kit高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa試劑盒英文名稱：MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化酶1ACCα抗體包裝100mg
巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)elisa試劑盒英文名稱：M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1,、2,、3、4抗體包裝1g
磷酸化蛋白激酶B抗體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)L-685458是一種有效的淀粉樣β蛋白前體γ分泌酶抑制劑, IC50為17 nM,比作用于其他天冬氨酰蛋白酶選擇性高50-100倍,。
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測(cè)試劑盒正磷酸鐵二水物
其他磷酸高鐵二水物,；磷酸鐵二水物；磷酸鐵(Ⅲ)二水物
英文名稱：Ferric phosphate dihydrate
其他英文名稱：Iron(III) phosphate dihydrate
產(chǎn)品規(guī)格：電子級(jí),，98%
包裝：25克
CAS號(hào)：13463-10-0
FePO4•2H2O=186.85
級(jí)別：電子級(jí)
總含量：≥98.0%
總鐵（Fe）：≥26.0%
灼燒失重（800℃,1h）：≤32.5%
重金屬：≤20mg/kg
性狀：微透紅色粉末,，不溶于水和醋酸，溶于無機(jī)酸
用途：生化研究,。用作顏料,、陶瓷金屬釉色釉料的重要原料，作為鐵鹽強(qiáng)化劑,，多用于蛋制品,、米制品和糊狀制品
保存：RT
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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