商品介紹:
細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生顯著的變化是染色體固縮,,DNA 裂解使細(xì)胞核形態(tài)產(chǎn)發(fā)生變化。熒光染料Hoechst33258 是一種無(wú)毒,、水溶性雙苯咪唑類化合物,可作為熒光探針與DNA 分子結(jié)合,。 在凋亡細(xì)胞中,細(xì)胞膜對(duì)Hoechst 33258 的攝取增高,,并且由于染色體高度濃縮,,Hoechst 33258 與之結(jié)合增強(qiáng),,染色呈強(qiáng)藍(lán)色熒光,而正常細(xì)胞只呈微弱熒光,,死細(xì)胞則不被染色,,由此可檢測(cè)出凋亡,。
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操作方法(以下操作針對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行)
1. 培養(yǎng)細(xì)胞并爬片;
2. 用冷PBS 洗滌細(xì)胞二次(貼壁細(xì)胞原位固定染色)
3. 加入500μL 的4%溶液(用戶自備),,4℃固定細(xì)胞10-30min;
4. 洗去固定液,,用PBS 洗兩遍,;
5. 滴加100μL Hoechst 33258 染色液,,室溫染色10 min,水沖凈晾干,;
6. 滴加一滴防淬滅封片液覆蓋樣本;
7. 以紫外光340nm 波長(zhǎng)激發(fā),,發(fā)射波長(zhǎng)為460nm,,可以在熒光顯微鏡下觀察,。
儲(chǔ)存:4℃,避光,,有效期6個(gè)月。
產(chǎn)品屬于:
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布,;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí),;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),,將培養(yǎng)板取出,,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
次野鳶尾黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acid blue 40FA20A抗體包裝500mg
甘草查爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acid Red 6B成纖維生長(zhǎng)因子18抗體包裝1g
槐苷英文名稱: Aflatoxin B1 from Aspergillus flavus叉頭蛋白O1抗體包裝25g
梨苷英文名稱: Aflatoxin B2纖維母生長(zhǎng)因子6抗體包裝5g
梨果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aflatoxin G1免疫球蛋白A Fc段受體1抗體包裝25g
梨葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aflatoxin G2脂肪延長(zhǎng)抗體包裝5g
芒柄花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Alizarin yellow R , sodium salt巖藻糖轉(zhuǎn)移2抗體包裝100mg
芒柄花,;芒柄花黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ALL, D-Allose雞白痢,、雞傷寒抗體包裝500mg
玫果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: alpha-D-Glucose-1-phosphate, disodium salt, hydrate范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體包裝250mg
囊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: alpha-Methylcinnamic acid卵泡抑抗體包裝100mg
桐堿英文名稱: Aluminum acetate, basicFas活化的絲/蘇激抗體包裝25g
五加(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum fluoride trihydrate脆性組三聯(lián)體抗體包裝5g
五加苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum oxide, active纖維母表面蛋白抗體包裝25g
五加皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum oxide, active前列腺E受體4相關(guān)蛋白抗體包裝5g
楤木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Aluminum potassium sulfate docecahydrateFLAG Tag標(biāo)簽抗體(N端)包裝5g
樟疫霉Phytophthora│cinnamomi Rands 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)腎上腺試劑盒去烏藥堿;Higenamine
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,,標(biāo)準(zhǔn)品腎上腺皮質(zhì)抗體試劑盒芹菜苷;Apiin
豬丹毒絲菌Erysipelothrix│rhuriopathiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR蛋白試劑盒1-羥基-2,3,4,7-四氧基山山
oechst 33258染色液(即用型)戊烷磺鈉
其他 1-戊烷磺鈉,;戊烷-1-磺鈉鹽;正戊烷磺鈉,;戊基磺鈉
英文名稱: Sodium 1-pentanesulfonate
其他英文名稱: Sodium pentanesulfonate;1-Pentanesulfonic acid sodium salt,;IPC-ALKS-5
產(chǎn)品規(guī)格: 超純,,99%
包裝:5克/25克/100克/500克
CAS號(hào):22767-49-3
C5H11O3SNa=174.19
級(jí)別:Ultra pure grade
含量:≥98.0%
水分:≤2.0%
性狀:結(jié)晶粉末,,熔點(diǎn)≥300℃。溶于水
用途:生化研究,。表面活性劑,用于研究多重乳狀液,。離子對(duì)色譜用
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